近日，中國農(nóng)科院周文彬團隊在水稻中發(fā)現(xiàn)一個低氮誘導(dǎo)下表達量顯著上升的基因OsDREBIC（簡稱D基因）。為了探究D基因的作用，科研人員將D基因?qū)胍吧退?，獲得轉(zhuǎn)基因水稻。該實驗主要流程如下，其中HHyg為潮霉素抗性基因，Kan'為卡拉霉素抗性基因，請回答。

（1）提取水稻的

RNA

RNA

，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，以cDNA為模板設(shè)計引物擴增D基因。為使目的基因與載體正確連接，在設(shè)計上游引物時需添加限制酶

BamHI

BamHI

的識別序列。
（2）切割無菌苗葉片置于添加

生長素和細胞分裂素

生長素和細胞分裂素

（填植物激素的名稱）的培養(yǎng)上，誘導(dǎo)形成愈傷組織。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時，用含

潮霉素

潮霉素

的選擇培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織。將經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的D基因過度表達水稻種植，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)量較野生型水稻高41.3%～68%。
（3）進一步研究發(fā)現(xiàn)，D基因表達產(chǎn)物發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子作用。轉(zhuǎn)錄因子是一類與基因上游特定序列專一性結(jié)合，激活或者抑制基因表達的蛋白質(zhì)。已知R基因會提高水稻光合作用中二氧化碳固定酶的含量和活性。為探究D轉(zhuǎn)錄因子對R基因的表達的影響，團隊人員用熒光素酶（能夠催化熒光素氧化發(fā)光的酶）報告基因法，將

R

R

基因的啟動子與熒光素酶基因融合形成嵌合基因表達載體（P₁），與另一個含有D基因的表達載體（P₂）一起導(dǎo)入水稻原生質(zhì)體，得到實驗組。加入熒光素后，結(jié)果如圖2。
①對照組水稻：原生質(zhì)體應(yīng)導(dǎo)入

P₁+不含有D基因的P₂

P₁+不含有D基因的P₂

。
②科學(xué)家繼續(xù)用N基因（氮素吸收轉(zhuǎn)運相關(guān)基因）替代R基因，進行如上實驗，熒光對比結(jié)果類似。結(jié)合以上實驗結(jié)果推測D基因有助于大幅增產(chǎn)的分子機制：

D基因通過表達D轉(zhuǎn)錄因子，同時激活R基因和N基因的表達，分別提高二氧化碳固定酶的含量和活性、促進氮素吸收轉(zhuǎn)運，從而實現(xiàn)水稻大幅增產(chǎn)

D基因通過表達D轉(zhuǎn)錄因子，同時激活R基因和N基因的表達，分別提高二氧化碳固定酶的含量和活性、促進氮素吸收轉(zhuǎn)運，從而實現(xiàn)水稻大幅增產(chǎn)

。