孤獨(dú)癥譜系障礙與基因S的變異有關(guān)，科研人員對(duì)獼猴的基因S進(jìn)行編輯，首次獲得孤獨(dú)癥模型猴。疾病模型猴可用于藥物效果評(píng)價(jià)研究。回答下列問題：
（1）以獼猴mRNA為模板

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

合成cDNA，再以cDNA為模板利用PCR擴(kuò)增可獲得大量基因S。與構(gòu)建基因組文庫相比，構(gòu)建cDNA文庫不包括基因中的

啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子

啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子

（答出2項(xiàng)）序列。
（2）用于擴(kuò)增S基因的引物需滿足的條件是

兩種引物分別與兩條模板鏈3′端的堿基序列配對(duì)

兩種引物分別與兩條模板鏈3′端的堿基序列配對(duì)

；為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列，該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的5端。PCR反應(yīng)中的每次循環(huán)可分為變性、退火（復(fù)性），延伸三步，其中退火（復(fù)性）的結(jié)果是

引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與單鏈DNA結(jié)合

引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與單鏈DNA結(jié)合

。
（3）先構(gòu)建含有編輯后的基因S的基因表達(dá)載體，再將其通過顯微注射法導(dǎo)入

受精卵

受精卵

中，然后利用胚胎工程的

早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植

早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植

（答出2項(xiàng)）技術(shù)手段獲得轉(zhuǎn)基因孤獨(dú)癥模型猴。
（4）為獲得更多孤獨(dú)癥譜系障礙模型猴，科研人員采用細(xì)胞核移植克隆獼猴，發(fā)現(xiàn)囊胚細(xì)胞核移植途徑比體細(xì)胞核移植途徑更有優(yōu)勢(shì)，其原因是

提供細(xì)胞核的囊胚細(xì)胞的分化程度更低，更容易體現(xiàn)其全能性

提供細(xì)胞核的囊胚細(xì)胞的分化程度更低，更容易體現(xiàn)其全能性

。若以保存的良種囊胚和相應(yīng)數(shù)量的非繁殖期受體雌性獼猴為材料進(jìn)行操作，以獲得具有優(yōu)良性狀的后代。該過程主要的操作步驟是

對(duì)受體雌性獼猴發(fā)情處理，胚胎移植，對(duì)受體雌性獼猴進(jìn)行是否妊娠的檢查，一段時(shí)間后受體雌性獼猴產(chǎn)下具有優(yōu)良性狀的后代

對(duì)受體雌性獼猴發(fā)情處理，胚胎移植，對(duì)受體雌性獼猴進(jìn)行是否妊娠的檢查，一段時(shí)間后受體雌性獼猴產(chǎn)下具有優(yōu)良性狀的后代

。
（5）為了獲取大量獼猴胚胎細(xì)胞用于藥物篩選，可用胰蛋白酶分散獼猴囊胚的

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

，取分散的胚胎干細(xì)胞作為初始材料進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)貼壁細(xì)胞達(dá)到生長基質(zhì)的80%表面面積后可進(jìn)行

傳代

傳代

培養(yǎng)。該培養(yǎng)過程需要提供無菌、無毒的條件，可對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，影響其滅菌效果的因素有溫度、壓力、滅菌時(shí)間，以及

滅菌材料和數(shù)量、鍋內(nèi)空氣含量

滅菌材料和數(shù)量、鍋內(nèi)空氣含量

等。