玉米（2n=20）是我國(guó)栽培面積最大的作物。為使其獲得抗除草劑性狀，獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米自交系A(chǔ)，技術(shù)路線如圖。
（1）為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達(dá)載體需用2種限制酶，選擇的原則是 AA（單選）。
①Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)
②G基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)
③酶切后，G基因形成的兩個(gè)黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個(gè)黏性末端序列相同
A．①③B．①④C．②③D．②④
（2）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有 復(fù)制原點(diǎn)和酶切位點(diǎn)復(fù)制原點(diǎn)和酶切位點(diǎn)（答出兩點(diǎn)即可）。
而作為基因表達(dá)載體，除滿(mǎn)足上述基本條件外，還需具有 啟動(dòng)子和終止子啟動(dòng)子和終止子（答出兩點(diǎn)即可）。
（3）如表是4種玉米自交幼胚組織培養(yǎng)不同階段的結(jié)果。據(jù)表可知，細(xì)胞脫分化時(shí)使用的激素是 2，4-D2，4-D，自交系 乙乙的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體。
| 激素 結(jié)果 自交系 |
2，4-D（2.0mg/L） | 6-BA（0.5mg/L） | IBA（2.0mg/L） |
| 愈傷組織形成率（%） | 芽的分化率（%） | 根的誘導(dǎo)率（%） | |
| 甲 | 99 | 13 | 90 |
| 乙 | 85 | 80 | 87 |
| 丙 | 88 | 83 | 12 |
| 丁 | 16 | 85 | 83 |
提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率
提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率
。農(nóng)桿菌的T-DNA攜帶插入其內(nèi)的片段轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的 染色體DNA
染色體DNA
上。篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織，需使用含 除草劑
除草劑
的選擇培養(yǎng)基。（5）轉(zhuǎn)化過(guò)程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化愈傷組織隔壁可能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在真核生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。用K分別處理以下愈傷組織，出現(xiàn)藍(lán)色的是
BD
BD
（多選）。A．無(wú)農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織
B．無(wú)農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織
C．農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織
D．農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織
（6）組織培養(yǎng)獲得的轉(zhuǎn)基因植株（核DNA中僅插入一個(gè)G基因）進(jìn)行自交，在子代含G基因的植株中，純合子占
1
3
1
3
（7）如表是鑒定含G基因植株的4種方法。請(qǐng)預(yù)測(cè)同一后代群體中，4種方法檢出的含G基因植株的比例，從小到大依次是
X4，X3，X2，X1
X4，X3，X2，X1
。| 方法 | 檢測(cè)對(duì)象 | 檢測(cè)目標(biāo) | 檢出的含G基因植株的比例 |
| PCR擴(kuò)增 | 基因組DNA | G基因 | X1 |
| 分子雜交 | 總mRNA | G基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 | X2 |
| 抗原-抗體雜交 | 總蛋白質(zhì) | G基因編碼的蛋白質(zhì) | X3 |
| 噴灑除草劑 | 幼苗 | 抗除草劑幼苗 | X4 |
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】A；復(fù)制原點(diǎn)和酶切位點(diǎn)；啟動(dòng)子和終止子；2，4-D；乙；提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率；染色體DNA；除草劑；BD；；X4，X3，X2，X1
1
3
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：20引用：1難度：0.5
相似題
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1．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲(chóng)基因文庫(kù)。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲(chóng)效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫(kù)。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種限制酶識(shí)別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請(qǐng)分析并回答下列問(wèn)題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過(guò)合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請(qǐng)寫(xiě)出PCR擴(kuò)增該cDNA時(shí)的兩個(gè)引物對(duì)應(yīng)的局部序列（前10個(gè)堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個(gè)初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個(gè)。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術(shù)又稱(chēng)為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問(wèn)題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時(shí)構(gòu)建cDNA文庫(kù)和基因組文庫(kù)，兩個(gè)文庫(kù)相比，cDNA文庫(kù)中含有的基因數(shù)目比基因組文庫(kù)中的少，其原因是．
（3）在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子是聚合酶識(shí)別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請(qǐng)回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來(lái)自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入基因表達(dá)載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細(xì)胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA分子上，再將能正常表達(dá)干擾素的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱(chēng)為．導(dǎo)入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細(xì)菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細(xì)胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類(lèi)，一類(lèi)是把正常基因?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來(lái)治療，第二類(lèi)是反義基因，即通過(guò)產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，來(lái)阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類(lèi)是編碼可以殺死癌細(xì)胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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