圖1為胰島素基因結(jié)構(gòu),圖2為pBR322質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖,圖中EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ和HindⅢ為限制酶,箭頭或線(xiàn)段所指為位點(diǎn)對(duì)應(yīng)酶切位點(diǎn)。研究人員欲用此質(zhì)粒構(gòu)建胰島素基因的表達(dá)載體,培育能產(chǎn)生人胰島素的大腸桿菌。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題:
(1)若要進(jìn)行胰島素基因的擴(kuò)增,常采用PCR技術(shù),該技術(shù)的原理是 DNA雙鏈復(fù)制DNA雙鏈復(fù)制。使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是 加熱到90~95°C加熱到90~95°C。在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的原因是 Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活。
(2)若利用圖2中的質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體,應(yīng)選擇的引物為 引物4和引物5引物4和引物5,在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),選擇 BamHI和HindⅢBamHI和HindⅢ作為切割質(zhì)粒和目的基因的限制酶,可提高目的基因和運(yùn)載體的正確連接效率。其中啟動(dòng)子的作用是 提供RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn);驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄提供RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn);驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。相對(duì)于采用重組大腸桿菌生產(chǎn)胰島素,采用酵母菌作為受體細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)是 酵母菌含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,可對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾酵母菌含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,可對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾。
(3)研究發(fā)現(xiàn),如果將胰島素B28位脯氨酸替換為天冬氨酸或者將它與B29位的賴(lài)氨酸交換位置,就可研發(fā)出速效胰島素類(lèi)似物。研發(fā)速效胰島素類(lèi)似物利用的現(xiàn)代生物工程技術(shù)是 蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】DNA雙鏈復(fù)制;加熱到90~95°C;Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會(huì)失活;引物4和引物5;BamHI和HindⅢ;提供RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn);驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄;酵母菌含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體,可對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾;蛋白質(zhì)工程
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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(1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括
(2)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí),解開(kāi)DNA雙鏈的酶是
(3)DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶,常見(jiàn)的有
(4)提取RNA時(shí),提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
(5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒(méi)有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6 -
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