鐮孢菌引起的小麥赤霉病被稱為小麥“游癥”，是威脅糧食安全的重大國際性難題。我國科學(xué)家從小麥近緣屬植物長穗偃麥草中首次克隆出主效抗赤霉病基因Fhb7（編碼一種谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶），為解決小麥赤霉病的世界性難題提供了“金鑰匙”。研究發(fā)現(xiàn)，用光誘導(dǎo)型啟動子（PrbcS）能夠使Fhb7基因表達(dá)，其結(jié)合T基因后能使Fhb7基因更高水平表達(dá)。
（1）PrbcS是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，能被

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別并結(jié)合，驅(qū)動基因的持續(xù)

轉(zhuǎn)錄

轉(zhuǎn)錄

。
（2）通過PCR技術(shù)擴(kuò)增Fhb7基因片段，反應(yīng)過程一般由95℃熱變性、55～60℃引物和模板配對、72℃延伸三個步驟，經(jīng)過多次循環(huán)完成。延伸階段選用72℃綜合考慮了兩個因素，這兩個因素是

防止DNA變性

防止DNA變性

和

保持Taq酶活性所需溫度條件

保持Taq酶活性所需溫度條件

，若研究人員在反應(yīng)緩沖溶液中加入4種dNTP時，誤加入了單一種類的ddNTP（即2、3雙脫氧核苷三磷酸，在脫氧核糖的3位置缺少一個羧基），則子鏈會停止延伸，分析其原因是

3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵

3號碳上不是羥基，不能與下一個脫氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯鍵

。
（3）如圖中甲、乙均為Fhb7基因表達(dá)載體構(gòu)建過程中的中間載體，請分析重組載體的部分構(gòu)建過程。
（注：Km^r為卡那霉素抗性基因，origin為復(fù)制原點(diǎn)，其余為限制酶酶切位點(diǎn)）
區(qū)別含有中間載體甲-PrbcS-*T與含有重組載體乙-PrbcS-*T的微生物的方法是

用含有卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)

用含有卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)

。經(jīng)酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.3kb,經(jīng)圖示信息分析，PrbcS-T的長度約為

1.8kb

1.8kb

。據(jù)圖分析，形成重組載體乙-PrbcS-*T，需要使用限制酶

EcoRⅠ

EcoRⅠ

切割，圖中重組載體乙-PrbcS-*T問號處有

EcoRⅠSphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ

EcoRⅠSphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ

種限制酶的酶切位點(diǎn)。