腦心肌炎病毒（EMCV，RNA病毒）是引起人、豬腦炎和心肌炎的病原體。為研制疫苗，科研人員按如圖流程培育轉(zhuǎn)基因酵母菌，來(lái)生產(chǎn)EMCV的衣殼蛋白VP1。其中，受體酵母菌是組氨酸合成缺陷型，HIS4基因表達(dá)的酶催化組氨酸的合成，C418是一種抗生素。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）過(guò)程①通過(guò)RT-PCR獲得目的基因，需要的工具酶有

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

、

熱穩(wěn)定性DNA聚合酶

熱穩(wěn)定性DNA聚合酶

。
（2）下列3種引物中，過(guò)程①應(yīng)選擇的是

ac

ac

。
a.5'-GGAATTCGCCACCATCCGAGTCGAAAACGCTGAA-3'
b.5'-TCGTCGACCATCGATAGCCACTCGCCTAACGCC-3'
c.5'-ATTTGCGCCGCTCACTCTAGCATCAAGACT-3'
（3）過(guò)程③將質(zhì)粒2導(dǎo)入大腸桿菌的目的是

讓其在大腸桿菌中復(fù)制

讓其在大腸桿菌中復(fù)制

，該過(guò)程需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。
（4）過(guò)程⑤將質(zhì)粒2線性化時(shí)使用的是

salⅠ

salⅠ

 （限制酶），過(guò)程⑥線性DNA需整合到酵母細(xì)胞的染色體DNA中目的基因才能

穩(wěn)定遺傳并表達(dá)

穩(wěn)定遺傳并表達(dá)

。
（5）線性DNA整合到酵母細(xì)胞染色體DNA時(shí)，可能是單拷貝整合，也可能是多拷貝整合。過(guò)程⑦先將酵母菌培養(yǎng)在缺乏

組氨酸

組氨酸

的培養(yǎng)基中，篩選獲得導(dǎo)入目的基因的酵母菌；后將篩選出的酵母菌接種于含2mg?L^-1G418的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，選擇生長(zhǎng)良好的酵母菌再轉(zhuǎn)接到含4mg?L^-1G418的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，其目的是

篩選出目的基因多拷貝整合的酵母菌

篩選出目的基因多拷貝整合的酵母菌

。
（6）研究人員用兔抗EMCV血清與酵母細(xì)胞生產(chǎn)的VP1蛋白進(jìn)行抗原-抗體免疫反應(yīng)試驗(yàn)，其目的是

檢測(cè)酵母細(xì)胞生產(chǎn)的VP1與EMCV的VP1的抗原性（結(jié)構(gòu)）是否一致

檢測(cè)酵母細(xì)胞生產(chǎn)的VP1與EMCV的VP1的抗原性（結(jié)構(gòu)）是否一致

。