人乳鐵蛋白(hLF)對細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究,主要流程如圖,圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點,neor為新霉素抗性基因,BLG基因為β乳球蛋白基因,GFP基因為綠色熒光蛋白基因,RT-PCR為反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng),是將RNA的反轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。請回答:
(1)過程①中,不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR,是因為 hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá))hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá))hLF基因。在RT-PCR過程中,加入的引物需在5'端添加SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列,以便于hLF基因插入pEB中。
(2)過程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是使人乳鐵蛋白基因 在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)。過程③中,使用人工膜制成的脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞,依據(jù)的主要原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
(3)將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng),能夠存活的細(xì)胞應(yīng)該是導(dǎo)入 pEB質(zhì)?;騪EBL質(zhì)粒pEB質(zhì)粒或pEBL質(zhì)粒的細(xì)胞,再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞中 是否有綠色熒光是否有綠色熒光,以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。
(4)要獲得轉(zhuǎn)基因山羊,還需要將成功表達(dá)hLF基因的乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到山羊去核的卵母去核的卵母細(xì)胞中,再借助 早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植技術(shù)孕育出羊羔。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá));SalⅠ和BamHⅠ;在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá);生物膜具有一定的流動性;pEB質(zhì)?;騪EBL質(zhì)粒;是否有綠色熒光;去核的卵母;早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:32引用:1難度:0.6
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