R-7是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA,可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列(3′-UTR)結(jié)合,進(jìn)而影響基因的表達(dá)。為研究R-7是否影響家蠶基因B(調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育)的表達(dá),科研人員將基因B中對應(yīng)3′-UTR的DNA片段與熒光素酶基因(R-7不影響熒光素酶基因的表達(dá))重組后導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞觀察其表達(dá)結(jié)果。請回答下列問題:
(1)利用
PCR
PCR
技術(shù)擴(kuò)增基因B中對應(yīng)3′-UTR的DNA片段,應(yīng)先依據(jù)該基因的一段核苷酸序列
該基因的一段核苷酸序列
合成引物。若對一個(gè)含基因B的DNA擴(kuò)增n代,則共需消耗2n-1
2n-1
對引物。
(2)圖甲中對應(yīng)3′-UTR的DNA片段應(yīng)插入到位點(diǎn)2
2
,原因是目的基因應(yīng)插入到啟動子與終止子之間,且不能破壞熒光素酶基因
目的基因應(yīng)插入到啟動子與終止子之間,且不能破壞熒光素酶基因
。重組載體中的熒光素酶基因在基因工程中作為標(biāo)記基因
標(biāo)記基因
。
(3)科研人員分別從實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞中提取蛋白質(zhì),經(jīng)處理檢測后獲得相對熒光值(在適宜條件下,熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光),其結(jié)果如圖乙所示。
①實(shí)驗(yàn)組為將重組載體導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細(xì)胞中,對照組1的處理為將含有熒光素酶基因的表達(dá)載體(不含對應(yīng)3′-UTR的DNA片段)導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細(xì)胞中,則對照組2的處理應(yīng)為將重組載體導(dǎo)入不含(或去除)R7的家蠶胚胎細(xì)胞中
將重組載體導(dǎo)入不含(或去除)R7的家蠶胚胎細(xì)胞中
。
②依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推知,R-7影響基因B的表達(dá),即通過遵循堿基互補(bǔ)配對
堿基互補(bǔ)配對
原則,R-7與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3′-UTR結(jié)合,進(jìn)而抑制
抑制
(填“促進(jìn)”或“抑制”)基因B的表達(dá)。