科研人員通過敲除里氏木霉基因組中去乙?;富颍℉DAC),探究組蛋白乙?;瘜w維素酶基因表達(dá)的影響,其主要過程如圖1。請據(jù)圖回答問題。
(1)PCR反應(yīng)體系中,除加入引物和模板DNA外,一般還需要加入 Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等。在最后一個循環(huán)結(jié)束后通常還需要維持72℃7min,其目的是 使子鏈充分延伸(或充分反應(yīng),獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段)使子鏈充分延伸(或充分反應(yīng),獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段)。
(2)引物設(shè)計是PCR的關(guān)鍵,本研究中引物R1的5'端添加與引物Fc互補(bǔ)的序列,其目的是 便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因)便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因)。在PCR5中加入的引物是 R2和FGR2和FG。
(3)在原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化過程中,加入適量的CaCl2和PEG溶液,其目的是 促進(jìn)外源DNA分子進(jìn)入原生質(zhì)體(或使原生質(zhì)體變成感受態(tài))促進(jìn)外源DNA分子進(jìn)入原生質(zhì)體(或使原生質(zhì)體變成感受態(tài))。涂布時,涂布器用 灼燒滅菌(或酒精引燃)灼燒滅菌(或酒精引燃)法滅菌后將原生質(zhì)體接種到含 新霉素新霉素的固體培養(yǎng)基上篩選。
(4)為探究敲除基因HDAG后對纖維素酶基因(CBHI、EGLI)和纖維素酶基因激活因子基因XYR1轉(zhuǎn)錄的影響,研究中先提取 (培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細(xì)胞的總RNA(或總RNA)(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細(xì)胞的總RNA(或總RNA),再利用熒光RT-PCR技術(shù)檢測,結(jié)果如圖2。依據(jù)結(jié)果可以得出的結(jié)論是 敲除基因HDAC使細(xì)胞中組蛋白去乙?;溉狈Γ?xì)胞中組蛋白乙?;潭雀?,可以顯著提高纖維素酶基因的表達(dá)敲除基因HDAC使細(xì)胞中組蛋白去乙酰化酶缺乏,細(xì)胞中組蛋白乙?;潭雀?,可以顯著提高纖維素酶基因的表達(dá)。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】Taq酶、dNTP(緩沖液、Mg2+)等;使子鏈充分延伸(或充分反應(yīng),獲得更多的完整目的片段,或獲得更多的完整目的片段);便于H1和GR拼接(便于PCR4時形成H1-GR融合基因);R2和FG;促進(jìn)外源DNA分子進(jìn)入原生質(zhì)體(或使原生質(zhì)體變成感受態(tài));灼燒滅菌(或酒精引燃);新霉素;(培養(yǎng)到第5天的)兩類菌株細(xì)胞的總RNA(或總RNA);敲除基因HDAC使細(xì)胞中組蛋白去乙?;溉狈?,細(xì)胞中組蛋白乙酰化程度高,可以顯著提高纖維素酶基因的表達(dá)
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:28引用:2難度:0.7
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(1)PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于
(2)PCR過程所依據(jù)的原理是
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2.數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù),其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是( ?。?img alt src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
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