藍(lán)細(xì)菌中的ictB蛋白能高效轉(zhuǎn)運(yùn)和濃縮CO₂從而提高細(xì)胞光合速率，我國(guó)科學(xué)家構(gòu)建了葉片特異性啟動(dòng)子Cab（葉綠體捕光色素蛋白Cab基因啟動(dòng)子）驅(qū)動(dòng)的藍(lán)細(xì)菌ictB基因表達(dá)載體，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得了轉(zhuǎn)ictB基因水稻，大大提高了水稻的產(chǎn)量。在ictB基因載體的構(gòu)建中，含Cab啟動(dòng)子和ictB基因的重組DNA分子和Ti質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)如圖1所示。請(qǐng)回答下列問題：

（1）為使重組DNA分子能定向插入T-DNA中，可用PCR的方法在重組DNA分子兩端添加限制酶識(shí)別序列，據(jù)圖可知，M端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是

BglⅠ

BglⅠ

，N端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是

EcoRV

EcoRV

。經(jīng)過酶切的重組DNA分子和Ti質(zhì)粒進(jìn)行連接時(shí)，可選用

DNA連接酶

DNA連接酶

（填“E.coli DNA連接酶”或“DNA連接酶”）。添加了限制酶識(shí)別序列的重組DNA分子與Ti質(zhì)粒的重組過程共需要

4

4

種酶。
（2）將農(nóng)桿菌液浸泡過的水稻愈傷組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中需加入

潮霉素

潮霉素

進(jìn)行篩選，最終獲得多個(gè)水稻株系a₁、a₂、a₃、a₁。對(duì)a₁～a₁四個(gè)水稻株系的ictB蛋白表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如圖2，其中a₄株系ictB蛋白表達(dá)量較低的原因可能是

a₄水稻株系中目的基因未表達(dá)

a₄水稻株系中目的基因未表達(dá)

，檢測(cè)應(yīng)選用的植物器官是

葉片

葉片

，原因是

Cab啟動(dòng)子是葉片特異性啟動(dòng)子，它使ictB基因只能選擇性的在葉片中表達(dá)

Cab啟動(dòng)子是葉片特異性啟動(dòng)子，它使ictB基因只能選擇性的在葉片中表達(dá)

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