圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒PO具有四環(huán)素抗性基因（tet^r）和氨芐青霉素抗性基因（amp^r）。請回答下列問題：

（1）用TaqDNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。線性載體P₁經(jīng)酶處理，在其兩端各添加了一個
胸腺嘧啶
胸腺嘧啶
，形成線性載體P₂。
（2）為篩選出含有重組質(zhì)粒P₃的菌落，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“+”代表生長，“-”代表不生長）。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是
B
B
（填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是
A類菌落含有P0、C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒
A類菌落含有P0、C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒
。

菌落類型
平板類型 A B C

無抗生素 + + +

氨芐青霉素 + + -

四環(huán)素 + - -

氨芐青霉素+四環(huán)素 + - -

（3）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，需設(shè)計引物進行PCR擴增，圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR擴增時應(yīng)選擇的一對引物是
乙和丙
乙和丙
。小明同學(xué)用圖中某對引物從一個菌落的質(zhì)粒中擴增出了400bp片段，請分析出現(xiàn)這種結(jié)果的原因：
目的基因反向連接
目的基因反向連接
。

【答案】胸腺嘧啶；B；A類菌落含有P0、C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒；乙和丙；目的基因反向連接

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：8引用：1難度：0.6

相似題

1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細胞壁的單細胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達載體，并將其導(dǎo)入鹽藻細胞中，進行了一系列實驗?；卮鹣铝袉栴}：
（1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地擴增目的基因的前提是需要

，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了

。
（2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達載體，還需要使用的酶是

（答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、

（答出3種）等結(jié)構(gòu)。
（3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關(guān)步驟和實驗結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是

。據(jù)表分析，該實驗結(jié)果說明

。

組別實驗步驟實驗結(jié)果

① ② ③

轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組）離心收集三組細
胞制備可溶性蛋
白質(zhì)樣品將TI注射到大白
兔體內(nèi)，獲取TI
抗體讓TI抗體和樣品
進行混合檢測有雜交帶

非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組）無雜交帶

陽性對照組（C組）有雜交帶

發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

A．科學(xué)家已對Bt基因的序列信息、表達產(chǎn)物等有了較為深入的了解

B．篩選Bt基因后可以利用PCR技術(shù)對其進行大量的擴增

C．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的核心工作是將Bt基因?qū)朊藁毎?/label>

D．檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功首先要進行分子水平的檢測

發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7

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固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL）	0	1	2	5	10
不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況	+++++	+++	+	-	-