大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根的侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育出表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株，主要過程如圖。分析回答下列問題：
（1）PCR擴(kuò)增sGFP的原理是 DNA復(fù)制DNA復(fù)制，該過程需要根據(jù) sGFP兩端的核苷酸序列sGFP兩端的核苷酸序列設(shè)計特異性引物序列，在PCR反應(yīng)體系中，添加的dNTP可提供 原料和能量原料和能量。
（2）由圖可知：為保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)，需將sGFP插入 構(gòu)巢曲霉啟動子和終止子構(gòu)巢曲霉啟動子和終止子之間。
（3）圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5'→3'）為 AGCTAGCT。
（4）過程②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶。
（5）過程③中需要配制細(xì)菌培養(yǎng)基，配制時要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到80℃左右后，再加入潮霉素溶液，潮霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因是 潮霉素在高溫滅菌時結(jié)構(gòu)會被破壞潮霉素在高溫滅菌時結(jié)構(gòu)會被破壞。用該培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)農(nóng)桿菌，得到多個菌落，提取全部細(xì)菌質(zhì)粒DNA，用BamHⅠ和HindⅢ完全酶切，可以得到 33種長度不同的DNA片段。
（6）將導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細(xì)胞懸液中，在適宜條件下完成轉(zhuǎn)染后利用濾膜過濾得到孢子細(xì)胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測 大麗輪枝菌細(xì)胞中綠色熒光的強(qiáng)度大麗輪枝菌細(xì)胞中綠色熒光的強(qiáng)度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達(dá)的大麗輪枝菌。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA復(fù)制；sGFP兩端的核苷酸序列；原料和能量；構(gòu)巢曲霉啟動子和終止子；AGCT；DNA連接酶；潮霉素在高溫滅菌時結(jié)構(gòu)會被破壞；3；大麗輪枝菌細(xì)胞中綠色熒光的強(qiáng)度
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/9/12 6:0:10組卷：48引用：4難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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