草甘膦是世界上使用最廣泛的除草劑，轉(zhuǎn)EPSPS基因抗除草劑水稻是中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所研發(fā)的水稻品種，靶標(biāo)對(duì)象為草甘膦?；卮鹣铝袉栴}：

（1）EPSPS基因一條鏈的兩端序列如圖1。
采用PCR技術(shù)獲取和擴(kuò)增EPSPS基因，需要使用的引物序列為

5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'

5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'

（標(biāo)出5′和3′端）。若PCR過程經(jīng)過4次循環(huán)，需要的引物的數(shù)量為

30

30

個(gè)。
（2）如表為操作過程中可能用到的限制酶，圖2為經(jīng)切割得到的目的基因及末端（除黏性末端序列外，其他堿基序列省略），圖3為要使用的質(zhì)粒，其中的Tet^r、Amp^r為標(biāo)記基因。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
識(shí)別位點(diǎn)及切割位點(diǎn)	-G↓GATCC-	-T↓GATCG-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

由圖3可以看出，將EPSPS基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法為

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

，作為表達(dá)載體，除圖中結(jié)構(gòu)，未標(biāo)注的結(jié)構(gòu)為

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

。對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，選用的兩種酶為

BclⅠ和SmaⅠ

BclⅠ和SmaⅠ

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（3）植物激素是植物體內(nèi)產(chǎn)生，能從產(chǎn)生部位運(yùn)送到作用部位，對(duì)植物的

生長發(fā)育有顯著影響

生長發(fā)育有顯著影響

的微量有機(jī)物，將導(dǎo)入EPSPS基因的細(xì)胞進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，所用培養(yǎng)基中需要添加植物激素，若要探究生長素和細(xì)胞分裂素的比例（比值為1、比值大于1、比值小于1）對(duì)培養(yǎng)結(jié)果產(chǎn)生的影響。實(shí)驗(yàn)思路為

取4組已滅菌的裝有MS培養(yǎng)基的錐形瓶，不同組別培養(yǎng)基的差異為不添加任何植物激素，生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值為1，比值大于1以及比值小于1，其他條件相同且適宜，觀察外植體的生長發(fā)育情況

取4組已滅菌的裝有MS培養(yǎng)基的錐形瓶，不同組別培養(yǎng)基的差異為不添加任何植物激素，生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值為1，比值大于1以及比值小于1，其他條件相同且適宜，觀察外植體的生長發(fā)育情況

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