科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖1：

（1）步驟①的技術(shù)名稱是

細(xì)胞核

細(xì)胞核

．
（2）將基因?qū)隕S細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有

ES細(xì)胞具有全能性

ES細(xì)胞具有全能性

．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的

基因表達(dá)載體

基因表達(dá)載體

．由于DNA復(fù)制時(shí)，子鏈只能由5′向3′方向延伸，故構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí)，可以從圖2A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取

B和C

B和C

作為引物．對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí)，可選用限制酶的組合為

HindⅢ和PstⅠ

HindⅢ和PstⅠ

或

EcoRⅠ和PstⅠ

EcoRⅠ和PstⅠ

．
（4）將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)

綠

綠

色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)．為檢測干擾素基因是否表達(dá)，可以采用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

的方法．