人類乳頭瘤病毒(HPV)有多種亞型,HPV45屬于高危型,與宮頸癌的發(fā)生密切相關。L1蛋白是組成HPV病毒衣殼的主要結構蛋白,科研人員進行了HPV45的抗L1蛋白單克隆抗體的制備與研究?;卮鹣铝袉栴}:
(1)提取HPV45的L1蛋白,注射到小鼠體內,其目的是
誘導小鼠產生能夠分泌抗L1蛋白抗體的B淋巴細胞
誘導小鼠產生能夠分泌抗L1蛋白抗體的B淋巴細胞
。一段時間后,取小鼠脾臟組織,剪碎用 胰蛋白/膠原蛋白酶
胰蛋白/膠原蛋白酶
酶處理,使其分散成單個細胞制成細胞懸液,與小鼠骨髓瘤細胞誘導融合,篩選出雜交瘤細胞。
(2)將得到的雜交瘤細胞接種到多孔培養(yǎng)板進行 克隆化
克隆化
培養(yǎng),分別取其上清液進行 抗體陽性/抗體
抗體陽性/抗體
檢測,檢測的原理及操作流程如圖1。經多次篩選后,取A、B、C、D四種雜交瘤細胞上清液進行檢測,結果如圖2。
①據圖分析,實驗過程中需將 L1蛋白
L1蛋白
作為抗原固定在固相載體上,分別取 不同稀釋倍數(濃度)的4種雜交瘤細胞上清液和未免疫小鼠血清
不同稀釋倍數(濃度)的4種雜交瘤細胞上清液和未免疫小鼠血清
加入反應體系,經洗滌后加入酶標抗體形成復合物,再次洗滌,加入相應底物,復合物攜帶的酶可與相應底物反應顯色,測吸光值,顏色越深吸光值越高。
②圖2結果表明 四種雜交瘤細胞上清液均含有能與L1蛋白結合的抗體,且上清液A中抗體與L1蛋白結合能力最強
四種雜交瘤細胞上清液均含有能與L1蛋白結合的抗體,且上清液A中抗體與L1蛋白結合能力最強
。
③依據圖2結果,研究人員推測A、B、C、D四種上清液中,A上清液的抗體與L1蛋白結合的位點是HPV45型病毒識別并侵染人體細胞的關鍵位點。為探究此推測,進行實驗,
實驗步驟如下:
步驟一:將小鼠宮頸細胞懸液均分為四組,編號甲、乙、丙、?。?br />步驟二:從稀釋倍數為1:320的A、B、C、D(雜交瘤細胞)上清液中分離提純抗體,分別與HPV45型病毒混合,再加入到小鼠宮頸細胞懸液甲、乙、丙、丁中
分別與HPV45型病毒混合,再加入到小鼠宮頸細胞懸液甲、乙、丙、丁中
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步驟三:在相同且適宜的條件下培養(yǎng)一段時間,檢測培養(yǎng)液中被侵染的宮頸細胞比例。實驗預期結果與結論:若 甲組中被侵染的宮頸細胞比例最高/甲組中被侵染的宮頸細胞比例高于其他組
甲組中被侵染的宮頸細胞比例最高/甲組中被侵染的宮頸細胞比例高于其他組
,則推測正確。
(3)科研人員制備HPV45的抗L1蛋白單克隆抗體,在醫(yī)學方面的應用有 用于HPV45病毒感染的診斷、治療、運載藥物(或診斷試劑、治療疾病、運載藥物)
用于HPV45病毒感染的診斷、治療、運載藥物(或診斷試劑、治療疾病、運載藥物)
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