人類乳頭瘤病毒(HPV)有多種亞型,HPV45屬于高危型,與宮頸癌的發(fā)生密切相關。L1蛋白是組成HPV病毒衣殼的主要結構蛋白,科研人員進行了HPV45的抗L1蛋白單克隆抗體的制備與研究?;卮鹣铝袉栴}:
(1)提取HPV45的L1蛋白,注射到小鼠體內,其目的是 誘導小鼠產生能夠分泌抗L1蛋白抗體的B淋巴細胞誘導小鼠產生能夠分泌抗L1蛋白抗體的B淋巴細胞。一段時間后,取小鼠脾臟組織,剪碎用 胰蛋白/膠原蛋白酶胰蛋白/膠原蛋白酶酶處理,使其分散成單個細胞制成細胞懸液,與小鼠骨髓瘤細胞誘導融合,篩選出雜交瘤細胞。
(2)將得到的雜交瘤細胞接種到多孔培養(yǎng)板進行 克隆化克隆化培養(yǎng),分別取其上清液進行 抗體陽性/抗體抗體陽性/抗體檢測,檢測的原理及操作流程如圖1。經多次篩選后,取A、B、C、D四種雜交瘤細胞上清液進行檢測,結果如圖2。
①據(jù)圖分析,實驗過程中需將 L1蛋白L1蛋白作為抗原固定在固相載體上,分別取 不同稀釋倍數(shù)(濃度)的4種雜交瘤細胞上清液和未免疫小鼠血清不同稀釋倍數(shù)(濃度)的4種雜交瘤細胞上清液和未免疫小鼠血清加入反應體系,經洗滌后加入酶標抗體形成復合物,再次洗滌,加入相應底物,復合物攜帶的酶可與相應底物反應顯色,測吸光值,顏色越深吸光值越高。
②圖2結果表明 四種雜交瘤細胞上清液均含有能與L1蛋白結合的抗體,且上清液A中抗體與L1蛋白結合能力最強四種雜交瘤細胞上清液均含有能與L1蛋白結合的抗體,且上清液A中抗體與L1蛋白結合能力最強。
③依據(jù)圖2結果,研究人員推測A、B、C、D四種上清液中,A上清液的抗體與L1蛋白結合的位點是HPV45型病毒識別并侵染人體細胞的關鍵位點。為探究此推測,進行實驗,
實驗步驟如下:
步驟一:將小鼠宮頸細胞懸液均分為四組,編號甲、乙、丙、丁;
步驟二:從稀釋倍數(shù)為1:320的A、B、C、D(雜交瘤細胞)上清液中分離提純抗體,分別與HPV45型病毒混合,再加入到小鼠宮頸細胞懸液甲、乙、丙、丁中分別與HPV45型病毒混合,再加入到小鼠宮頸細胞懸液甲、乙、丙、丁中。
步驟三:在相同且適宜的條件下培養(yǎng)一段時間,檢測培養(yǎng)液中被侵染的宮頸細胞比例。實驗預期結果與結論:若 甲組中被侵染的宮頸細胞比例最高/甲組中被侵染的宮頸細胞比例高于其他組甲組中被侵染的宮頸細胞比例最高/甲組中被侵染的宮頸細胞比例高于其他組,則推測正確。
(3)科研人員制備HPV45的抗L1蛋白單克隆抗體,在醫(yī)學方面的應用有 用于HPV45病毒感染的診斷、治療、運載藥物(或診斷試劑、治療疾病、運載藥物)用于HPV45病毒感染的診斷、治療、運載藥物(或診斷試劑、治療疾病、運載藥物)。
【考點】單克隆抗體及其應用.
【答案】誘導小鼠產生能夠分泌抗L1蛋白抗體的B淋巴細胞;胰蛋白/膠原蛋白酶;克隆化;抗體陽性/抗體;L1蛋白;不同稀釋倍數(shù)(濃度)的4種雜交瘤細胞上清液和未免疫小鼠血清;四種雜交瘤細胞上清液均含有能與L1蛋白結合的抗體,且上清液A中抗體與L1蛋白結合能力最強;分別與HPV45型病毒混合,再加入到小鼠宮頸細胞懸液甲、乙、丙、丁中;甲組中被侵染的宮頸細胞比例最高/甲組中被侵染的宮頸細胞比例高于其他組;用于HPV45病毒感染的診斷、治療、運載藥物(或診斷試劑、治療疾病、運載藥物)
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/7/5 8:0:9組卷:2引用:2難度:0.6
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