絞股藍(lán)又名七葉膽，是一種含有中草藥成分的天然植物。具有清心提神、抗疲勞、清熱解毒、祛痰止咳、降低膽固醇和血脂等功效。不僅如此、絞股藍(lán)細(xì)胞中還含有抗煙草花葉病毒（TMV）的基因，可以合成一種抗TMV蛋白，使其葉片對(duì)TMV具有抗感染特性。煙草是具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的雙子葉植物，TMV的感染會(huì)導(dǎo)致煙草大幅度減產(chǎn)。科研人員利用基因工程技術(shù)培育出了抗TMV的煙草。主要流程如圖所示。
（1）從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA，然后合成目的基因。圖中①過(guò)程需要

反（逆）轉(zhuǎn)錄

反（逆）轉(zhuǎn)錄

酶。在體外通過(guò)

PCR擴(kuò)增

PCR擴(kuò)增

技術(shù)可以獲得較多的目的基因。
（2）圖中能體現(xiàn)基因工程核心的是

③

③

過(guò)程（用圖中的數(shù)字表示），該過(guò)程要用到的酶是

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶

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（3）④過(guò)程表示將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞，常用方法是

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

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（4）由圖分析，在③過(guò)程構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是

卡那霉素抗性

卡那霉素抗性

基因。
（5）⑤過(guò)程中，煙草體細(xì)胞經(jīng)過(guò)

脫分化

脫分化

形成愈傷組織，然后經(jīng)過(guò)再分化形成再生植株。
（6）在個(gè)體水平上檢驗(yàn)獲得的煙草能否抗TMV的方法是

用TMV感染煙草，觀察煙草是否出現(xiàn)患病癥狀

用TMV感染煙草，觀察煙草是否出現(xiàn)患病癥狀

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