安莎霉素是一類主要由來源于海洋的稀有放線菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，具有較高的抗菌活性和藥用價值?？蒲腥藛T通常從深海采集淤泥樣本，再分離、純化并篩選出產(chǎn)安莎霉素的放線菌，其分離培養(yǎng)流程如圖。請分析回答下列問題：

（1）過程①的接種方法為

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

。
（2）統(tǒng)計菌落種類和數(shù)量時要每隔24h觀察統(tǒng)計一次，直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定，以防止培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致

遺漏菌落的種類和數(shù)目

遺漏菌落的種類和數(shù)目

。
（3）研究人員發(fā)現(xiàn)產(chǎn)安莎霉素的放線菌具有一個普遍的共性--氨基酸缺陷型。從篩選目的分析，基本培養(yǎng)基與完全培養(yǎng)基存在差異的成分是

氨基酸

氨基酸

。為了初步鑒定營養(yǎng)缺陷型放線菌菌株，科研人員進行了如下操作：
①用接種針挑取

菌落A

菌落A

（填“菌落A”或“菌落B”）接種于盛有完全液體培養(yǎng)的離心管中，28℃振蕩培養(yǎng)3～5天后，離心取沉淀物，用無菌水洗滌3次制成菌懸液。
②吸取1mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中，傾注15mL融化開冷卻至50℃左右的基本培養(yǎng)基，待其冷凝后用記號筆在皿底劃分五個區(qū)域，標(biāo)記A、B、C、D、E。
③在劃分的五個區(qū)域上放入少量分組的氨基酸粉末（如下表所示），經(jīng)培養(yǎng)后，觀察生長圈出現(xiàn)的區(qū)域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。

組別	所含氨基酸
A	組氨酸	蘇氨酸	谷氨酸	賴氨酸	亮氨酸
B	精氨酸	天冬氨酸	賴氨酸	甲硫氨酸	苯丙氨酸
C	酪氨酸	谷氨酸	賴氨酸	色氨酸	丙氨酸
D	甘氨酸	天冬氨酸	蘇氨酸	色氨酸	絲氨酸
E	半胱氨酸	亮氨酸	苯丙氨酸	丙氨酸	絲氨酸

在上述鑒定實驗中，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基A、D區(qū)域出現(xiàn)生長圈，說明該氨基酸缺型菌株屬于

蘇氨酸

蘇氨酸

缺陷型。
（4）科研人員分離、純化出產(chǎn)安莎霉素的放線菌后，需要利用PCR技術(shù)大量擴增其DNA上的16SrRNA保守片段，然后通過DNA序列比對進行菌種親源關(guān)系的鑒定。查找數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)該放線菌的16SrRNA目的基因片段及相應(yīng)限制酶識別序列如圖所示：

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	HindⅢ	SacⅠ
識別序列和切割位點	G↓AATTCG	G↓ATCC	A↓AGCTT	GAGCT↓C

為了獲得目的基因16SrRNA，需要使用的限制酶是

EcoRⅠ、SacⅠ

EcoRⅠ、SacⅠ

。得到目的基因以后就可以利用PCR技術(shù)對16SrRNA進行體外擴增，擴增目的基因的原理是

DNA半保留復(fù)制

DNA半保留復(fù)制

，此過程需要加入

熱穩(wěn)定DNA聚合酶

熱穩(wěn)定DNA聚合酶

催化。