棉鈴蟲和蚜蟲是常見的植物害蟲,Cry1A基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)棉鈴蟲等鱗翅目昆蟲有較強(qiáng)的毒性,GNA基因的表達(dá)產(chǎn)物對(duì)蚜蟲等刺吸式口器的昆蟲有較強(qiáng)的毒性??蒲腥藛T將Cry1A基因與GNA基因連接在一起,構(gòu)建了雙抗蟲基因的重組表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞,獲得了具有雙抗性的轉(zhuǎn)基因煙草,其部分過程如圖1所示,請(qǐng)分析并回答以下問題:
注:Klenow能將黏性末端轉(zhuǎn)變?yōu)槠侥┒?;圖中不同限制酶切出的黏性末端均不同。
(1)過程③將Cry1A基因與GNA基因相連,可選用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶(“E?coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”)。
(2)過程④應(yīng)該選用 EcoRⅠ和HindⅢEcoRⅠ和HindⅢ(填圖中限制酶)切割植物表達(dá)載體,以便和目的基因相連,形成重組表達(dá)載體。
(3)將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前,一般先用 Ca2+Ca2+處理農(nóng)桿菌,使其成為感受態(tài)細(xì)胞。
(4)讓農(nóng)桿菌侵染煙草葉片前,需要通過實(shí)驗(yàn)篩選農(nóng)桿菌:將培養(yǎng)農(nóng)桿菌的培養(yǎng)基倒平板后均分為A、B兩組,在A組培養(yǎng)基中涂布一定量的鏈霉素,在B組培養(yǎng)基中涂布等量的卡那霉素和鏈霉素。往A組培養(yǎng)基中接種適量農(nóng)桿菌,待長出菌落后,用影印法接種到B組培養(yǎng)基上,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2,其中 1、31、3(填圖中對(duì)應(yīng)的數(shù)字)菌落對(duì)應(yīng)的農(nóng)桿菌可能是符合要求的,即含有 重組表達(dá)載體重組表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。
(5)通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)農(nóng)桿菌侵染的煙草葉片,獲得煙草幼苗。欲從個(gè)體水平檢測(cè)這些植株是否成功導(dǎo)入目的基因,方法是 將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉(zhuǎn)基因植株上,觀察是否抗蟲將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉(zhuǎn)基因植株上,觀察是否抗蟲。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】T4DNA連接酶;EcoRⅠ和HindⅢ;Ca2+;1、3;重組表達(dá)載體;將適量的棉鈴蟲和蚜蟲接種到轉(zhuǎn)基因植株上,觀察是否抗蟲
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:3引用:3難度:0.7
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1.用限制酶EcoRⅤ單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒,可產(chǎn)生14kb(1kb即1000個(gè)堿基對(duì))的長鏈,而同時(shí)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒,可得到三種長度的DNA片段,見圖(其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個(gè)黏性末端)。
若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒,則產(chǎn)生的DNA片段的長度為( ?。?/h2>A.2.5和5.5 B.2.5和6 C.5.5和8 D.6和8 發(fā)布:2024/11/14 4:0:2組卷:89引用:9難度:0.7 -
2.基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速,如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是( )
A.若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的,則該基因中不含啟動(dòng)子序列 B.?dāng)U增目的基因時(shí),利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3′-端進(jìn)行子鏈合成 C.導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞 D.利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上 發(fā)布:2024/11/14 7:0:1組卷:62引用:7難度:0.7 -
3.經(jīng)由食物攝取過量生物胺會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng),嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命,因此必須對(duì)食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶(MCO)能高效分解生物胺,基于基因工程規(guī)模化生產(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因,然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
(1)通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物,涉及如下步驟,則合理的操作步驟排序是
①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)?;a(chǎn)目標(biāo)蛋白
④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
(2)在PCR過程中,引物的功能是
A.啟動(dòng)DNA復(fù)制
B.規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
C.解旋DNA雙鏈
D.充當(dāng)復(fù)制模板
(3)為獲得目的基因MCO(圖甲灰色表示的序列),正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
(4)獲取目的基因后,需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
(5)在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中,溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
(6)若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端,那么載體質(zhì)粒pCLY15(圖丙中圖1)需用
(7)下列實(shí)驗(yàn)操作中,能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
A.從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA,用合適的限制酶切割
B.在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑,以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
C.從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA,以此為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)
D.將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc(四環(huán)素)的平板上,根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別發(fā)布:2024/11/14 4:30:2組卷:29引用:3難度:0.5
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