大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根的侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育出表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株，主要過程如下。分析回答下列問題：
（1）過程①中，PCR擴(kuò)增sGFP的原理是 DNA的半保留復(fù)制DNA的半保留復(fù)制，該過程除需要根據(jù) sGFP兩端（3'端）核苷酸序列sGFP兩端（3'端）核苷酸序列設(shè)計特異性引物序列外，為保證sGFP正確插入到質(zhì)粒中，還需要在目的基因兩端添加圖中 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ限制酶的識別序列。
（2）過程②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶。研究中將sGFP插入啟動子和終止子之間的目的是 保證sCFP能在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)保證sCFP能在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)。
（3）過程③中需要配制細(xì)菌培養(yǎng)基，配制時要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到80℃左右后，再加入潮霉素溶液，潮霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因是 潮霉素在滅菌時結(jié)構(gòu)被破壞，無法篩選出轉(zhuǎn)化成功的受體細(xì)胞潮霉素在滅菌時結(jié)構(gòu)被破壞，無法篩選出轉(zhuǎn)化成功的受體細(xì)胞。
（4）選擇過程③篩選培養(yǎng)得到的不同農(nóng)桿菌菌落，分別提取細(xì)菌質(zhì)粒DNA，并用BamHⅠ和HindⅢ完全酶切，可以得到 三三種長度不同的DNA片段。
（5）將導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細(xì)胞懸液中，在適宜條件下完成轉(zhuǎn)染后利用濾膜過濾得到孢子細(xì)胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測 大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度，篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達(dá)的大麗輪枝菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA的半保留復(fù)制；sGFP兩端（3'端）核苷酸序列；HindⅢ和BamHⅠ；DNA連接酶；保證sCFP能在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)；潮霉素在滅菌時結(jié)構(gòu)被破壞，無法篩選出轉(zhuǎn)化成功的受體細(xì)胞；三；大麗輪枝菌菌絲細(xì)胞中綠色熒光強(qiáng)度
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：62引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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