心臟移植是挽救終末期心臟病患者生命唯一有效的手段，然而心臟移植過程中會發(fā)生缺血再灌注損傷（IRI），可能導(dǎo)致心臟壞死。研究發(fā)現(xiàn)，IRI通過促進(jìn)Caspase 8等一系列凋亡基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡壞死最終引起器官損傷。根據(jù)Caspase 8基因合成的小干擾RNA（siRNA）可以使Gaspase 8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官損傷。如圖1是利用豬的心肌細(xì)胞開展siRNA作用研究的示意圖。

回答下列問題：
（1）圖中步驟②構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

等工具酶。與直接將sRNA導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞相比，通過重組質(zhì)粒將siRNA對應(yīng)的DNA序列導(dǎo)入心肌細(xì)胞，其優(yōu)點是

可持續(xù)產(chǎn)生siRNA，使靶基因長時間沉默（或：可以使質(zhì)粒只在特定的組織中表達(dá)；或：可構(gòu)建某基因永久沉默的實驗動物模型）

可持續(xù)產(chǎn)生siRNA，使靶基因長時間沉默（或：可以使質(zhì)粒只在特定的組織中表達(dá)；或：可構(gòu)建某基因永久沉默的實驗動物模型）

（答出一點）。
（2）siRNA對應(yīng)DNA序列在心肌細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生的si RNA，與RISC組裝形成基因沉默復(fù)合物，通過抑制基因表達(dá)的

翻譯

翻譯

過程，使Caspase 8基因沉默，從而降低IRI引起的細(xì)胞凋亡。
（3）研究人員根據(jù)Caspase 8基因的堿基序列，設(shè)計了三種序列分別導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞，通過測定靶基因Caspase 8的mRNA含量來確定最優(yōu)序列。測定mRNA含量時，需提取心肌細(xì)胞的總RNA，經(jīng)過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

過程得到cDNA，再進(jìn)行PGR擴增，測定PCR產(chǎn)物量，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此判斷最優(yōu)序列是

序列2

序列2

。
（4）選用豬的心肌細(xì)胞做受體細(xì)胞是因為豬在基因、解剖結(jié)構(gòu)、生理生化和免疫反應(yīng)等方面與人類極為相似。為了解決心臟移植供體短缺問題，許多科學(xué)家正在研究用豬心臟代替人的心臟。你認(rèn)為將豬心臟移植到人體面臨的最大挑戰(zhàn)是

免疫排斥反應(yīng)

免疫排斥反應(yīng)

，請說出一種解決這一問題的思路：

可以利用基因工程技術(shù)將豬與免疫排斥有關(guān)的抗原基因敲除；轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細(xì)胞偽裝人的細(xì)胞

可以利用基因工程技術(shù)將豬與免疫排斥有關(guān)的抗原基因敲除；轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細(xì)胞偽裝人的細(xì)胞

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