苯丙酮尿癥是PKU基因突變引起，研究人員嘗試用基因治療的方式治療該疾病，即將正?；駾導(dǎo)入攜帶有突變基因的細胞中。圖甲為A、B、C三種質(zhì)粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙表示重組載體的示意圖。其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因（基因表達的產(chǎn)物將無色化合物X-gal轉(zhuǎn)化成一種藍色物質(zhì)，菌落呈藍色），EcoRI（0.7Kb）、Pvul（0.8Kb）等為限制酶及其切割位點與復(fù)制原點之間的距離。已知1Kb=1000個堿基對。請結(jié)合所學(xué)知識回答：
（1）將正常的D基因?qū)胧荏w細胞的基因工程操作步驟中，其核心是 基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建，據(jù)圖分析上述甲圖中三種質(zhì)粒中不宜作為運載體的有 ACAC，請分析原因 質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C復(fù)制原點被限制酶切割質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C復(fù)制原點被限制酶切割。
（2）若要獲取目的基因D，上述乙圖中應(yīng)選擇限制酶 PvuⅠPvuⅠ對其所在的DNA進行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，通?？筛鶕?jù)該基因首尾兩端的已知核苷酸序列合成 引物引物，利用 PCRPCR技術(shù)得到大量目的基因。
（3）將目的基因D和甲圖中可做載體的質(zhì)粒進行連接后，會得到圖丙中三種連接方式。需要選出正向連接的重組質(zhì)粒，可使用 EcoRⅠEcoRⅠ酶切割所獲得的重組質(zhì)粒。完全酶切后，進行電泳分析。若是載體自連，電泳圖譜中出現(xiàn)2.7Kb 一條帶，若是正向連接載體和反向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長度分別為 1.1Kb和5.6Kb1.1Kb和5.6Kb和 3.1Kb和3.6Kb3.1Kb和3.6Kb。
（4）選擇自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，在已轉(zhuǎn)化的含重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒的受體細胞中和未轉(zhuǎn)化成功的細胞中如何篩選出成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞？在含有氨芐青霉素的加入X-gal培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細胞，形成白色菌落的即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞，藍色菌落的沒有導(dǎo)入重組細胞在含有氨芐青霉素的加入X-gal培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細胞，形成白色菌落的即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞，藍色菌落的沒有導(dǎo)入重組細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體的構(gòu)建；AC；質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C復(fù)制原點被限制酶切割；PvuⅠ；引物；PCR；EcoRⅠ；1.1Kb和5.6Kb；3.1Kb和3.6Kb；在含有氨芐青霉素的加入X-gal培養(yǎng)基上培養(yǎng)經(jīng)轉(zhuǎn)化后的細胞，形成白色菌落的即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細胞，藍色菌落的沒有導(dǎo)入重組細胞
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：15引用：1難度：0.5
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1．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應(yīng)的局部序列（前10個堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛毎麜r，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑毎约m正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細胞，科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失的小鼠進行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA分子上，再將能正常表達干擾素的細胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細胞而不是導(dǎo)入上皮細胞是因為ES細胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募毎校员磉_出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進行互補結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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