L-肉堿具有參與脂肪氧化、抗疲勞、延遲患阿爾茨海默綜合征等功能。據(jù)報(bào)道大腸桿菌能將巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿，但效率較低?？蒲腥藛T通過(guò)基因工程將BCD基因、F基因以及T基因?qū)氲酱竽c桿菌細(xì)胞內(nèi)以提高L-肉堿的轉(zhuǎn)化率。實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果如圖所示，分析并回答下列問(wèn)題：

（1）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用PCR技術(shù)獲得目的基因，PCR反應(yīng)體系需要加入的有機(jī)物有DNA模板、dNTP、耐高溫DNA聚合酶和

引物

引物

。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不能將BCD基因、F基因以及T基因直接導(dǎo)入到大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，而是構(gòu)建重組質(zhì)粒后再導(dǎo)入大腸桿菌，原因是

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能夠表達(dá)

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能夠表達(dá)

，并能遺傳給下一代。圖中兩個(gè)重組質(zhì)粒目的基因的首端都含有啟動(dòng)子T7，T7是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。
（2）將重組所粒1和重組質(zhì)粒2導(dǎo)入大腸桿菌時(shí)，應(yīng)用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于

易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子

易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子

的感受態(tài)。
（3）為了篩選出同時(shí)含有BCD基因、F基因以及T基因的大腸桿菌，實(shí)驗(yàn)的思路是

在同時(shí)含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌

在同時(shí)含有卡那霉素和氯霉素培養(yǎng)基上挑選單克隆大腸桿菌

。
（4）研究發(fā)現(xiàn)巴豆甜菜堿轉(zhuǎn)化成L-肉堿是一個(gè)可逆反應(yīng)過(guò)程，得到的工程菌在含有巴豆甜菜堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)2小時(shí)后，L-肉堿的含量基本穩(wěn)定，此時(shí)可以

及時(shí)移除產(chǎn)物（更換培養(yǎng)液），使反應(yīng)向生成L-肉堿的方向進(jìn)行

及時(shí)移除產(chǎn)物（更換培養(yǎng)液），使反應(yīng)向生成L-肉堿的方向進(jìn)行

，以提高產(chǎn)量。