研究人員從土壤中分離獲得能分解纖維素的細菌（A菌），從A菌中提取一種纖維素酶基因（CBHI）并進行PCR擴增，然后與高效表達載體pUT質粒（圖1）連接構建成重組質粒并導入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強的工程菌（B菌）。
| 限制酶 | 識別序列及酶切位點 |
| BglⅡ | A↓GATCT |
| BstEⅡ | G↓GTAACC |
| SacⅠ | G↓AGCTC |
| MspⅠ | G↓CGG |
| BamHⅠ | G↓GATCC |
（1）CBHⅡ基因兩端需添加相關酶切位點才能與pUT質粒連接，因此在擴增CBHⅡ基因時，需要在兩種引物上分別添加
AGATCT
AGATCT
序列和 GGTAACC
GGTAACC
序列。（2）為鑒定重組質粒是否構建成功，將重組質粒導入A菌，并將其接種在含
抗生素N
抗生素N
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后提取3個不同菌落的質粒分別進行雙酶切驗證將酶切片段和CBHⅡ基因分別進行電泳，結果如下圖2所示。據此分析，菌落 2、3
2、3
中成功導入了重組質粒。（3）圖3中B鏈為轉錄模板鏈，轉錄時mRNA自身的延伸方向為5′→3′。為了使CBHⅡ基因按照正確的方向與已被酶切的pUT質粒連接，圖中酶切位點1和酶切位點2所對應的酶分別是
BglⅡB、stEⅡ
BglⅡB、stEⅡ
。（4）為檢測B菌的纖維素分解能力，將含有20%纖維素的培養(yǎng)基分為三組，進行不同處理后，在相同條件下培養(yǎng)一段時間，測定培養(yǎng)基中纖維素含量，結果如圖4所示，則對照組2 的處理為
接種A菌
接種A菌
，說明 B菌分解纖維素能力比A菌更強
B菌分解纖維素能力比A菌更強
。預期該工程菌在處理廢棄物及保護環(huán)境方面可能的應用，舉一個實例 降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來的空氣污染
降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來的空氣污染
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】AGATCT；GGTAACC；抗生素N；2、3；BglⅡB、stEⅡ；接種A菌；B菌分解纖維素能力比A菌更強；降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來的空氣污染
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：21引用：1難度：0.7
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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