轉(zhuǎn)基因玉米株系BBHTL8-1含有Cry1Ab、Cry3Bb、cp4epsps、ZmHPT和ZmTMT共5個(gè)基因，每個(gè)基因和其他結(jié)構(gòu)構(gòu)成一個(gè)基因表達(dá)框（見(jiàn)圖），且它們構(gòu)建在一個(gè)載體上。外源插入片段位于玉米基因組第4染色體。結(jié)合所學(xué)內(nèi)容回答以下問(wèn)題：

備注：Cry1Ab（抗鱗翅目害蟲(chóng)基因）、Cry3Bb（抗鞘翅目害蟲(chóng)基因）、cp4epsps[耐草甘膦（除草劑）基因]、ZmHPT和ZmTMT（維生素E合成途徑兩個(gè)關(guān)鍵基因）。LB、RB（基因表達(dá)框的左右端），箭頭方向表示基因表達(dá)的方向。
（1）構(gòu)建基因表達(dá)框，需要的工具酶有

限制酶、DNA連接酶

限制酶、DNA連接酶

。
（2）若用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因轉(zhuǎn)入玉米細(xì)胞，圖示基因表達(dá)框需先整合到

農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)的Ti質(zhì)粒上的T-DNA中

農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)的Ti質(zhì)粒上的T-DNA中

。
（3）若圖示箭頭方向表示的是基因表達(dá)的方向，則pOsAct2應(yīng)該是

Cry3Bb

Cry3Bb

的啟動(dòng)子。若讓維生素E在玉米胚中特異性表達(dá)，該特異性由圖中的

pGLB1

pGLB1

決定。
（4）若用PCR技術(shù)擴(kuò)增出Cry3Bb基因，需要設(shè)計(jì)特定的

引物

引物

，至少經(jīng)過(guò)

3

3

輪才能得到完整的Cry3Bb基因。
（5）轉(zhuǎn)基因成功的玉米其優(yōu)良性狀不能穩(wěn)定遺傳，請(qǐng)簡(jiǎn)要寫(xiě)出培育出穩(wěn)定遺傳株系的方法

讓其不斷自交選擇穩(wěn)定遺傳個(gè)體

讓其不斷自交選擇穩(wěn)定遺傳個(gè)體

。