研究者將釀酒酵母S288c的APAl基因與EGFP（增強(qiáng)型綠色熒光蛋白）基因構(gòu)成融合基因，并進(jìn)一步構(gòu)建表達(dá)載體（如圖甲所示）。以該載體為模板，再通過PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)突變技術(shù)向APAl基因中分別引入突變位點(diǎn)，經(jīng)典的大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)成為基于PCR技術(shù)的定點(diǎn)誘變技術(shù)中應(yīng)用最普遍的方法，操作過程如圖乙所示，其中引物箭頭代表子鏈延伸方向。回答下列問題：
（1）構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)將融合基因放于 啟動(dòng)子啟動(dòng)子、終止子終止子等結(jié)構(gòu)之間，以保證目的基因的轉(zhuǎn)錄。為實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒和融合基因的高效連接，切割質(zhì)粒時(shí)選用限制酶XmaⅠ而不選用限制酶SmaⅠ的原因是 SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接。為將融合基因構(gòu)建在質(zhì)粒上，還需要 BglII、DNA連接酶BglII、DNA連接酶等酶。
（2）利用大引物PCR進(jìn)行定點(diǎn)誘變需要進(jìn)行兩輪PCR（PCR1和PCR2）。在PCR1中，至少需要 22個(gè)循環(huán)才能獲得相應(yīng)的大引物模板。在PCR2中？處的引物應(yīng)選用大引物兩條鏈中的 ②②（填“①”或“②”）鏈的子鏈。
（3）若在熒光顯微鏡下觀察到受體細(xì)胞有綠色熒光，則表明 APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達(dá)（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達(dá)（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物），EGFP基因的作用是 作為標(biāo)記基因，用于目的基因的檢測(cè)和鑒定作為標(biāo)記基因，用于目的基因的檢測(cè)和鑒定。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】啟動(dòng)子；終止子；SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接；BglII、DNA連接酶；2；②；APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達(dá)（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）；作為標(biāo)記基因，用于目的基因的檢測(cè)和鑒定
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：25引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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