回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題:
(1)從水稻體細(xì)胞中提取總RNA,利用
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶獲得B基因編碼蛋白的序列,將該序列和Luc基因(表達的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光)連接成的融合基因必須連接到表達載體的啟動子和終止子之間,其中啟動子是 RNA聚合酶
RNA聚合酶
的結(jié)合位點。
(2)將重組載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌時,常用氯化鈣處理農(nóng)桿菌的目的是 增加農(nóng)桿菌細(xì)胞壁的通透性
增加農(nóng)桿菌細(xì)胞壁的通透性
。處理后再將農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移到適宜培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間,目的是 使農(nóng)桿菌恢復(fù)正常生理狀態(tài)
使農(nóng)桿菌恢復(fù)正常生理狀態(tài)
。
(3)過程②利用了農(nóng)桿菌的T-DNA片段,將目的基因 整合(或轉(zhuǎn)移)
整合(或轉(zhuǎn)移)
到受體細(xì)胞的染色體DNA上,完成后需在培養(yǎng)基中添加 潮霉素
潮霉素
對水稻愈傷組織進行脫菌處理。
(4)借助Luc基因的表達來完成第二次鑒定篩選,具體方法是 檢測加入熒光素的細(xì)胞中是否發(fā)出熒光
檢測加入熒光素的細(xì)胞中是否發(fā)出熒光
。
(5)在植物克隆中,盡量選擇 性狀優(yōu)良、細(xì)胞全能性表達充分
性狀優(yōu)良、細(xì)胞全能性表達充分
的基因型。有研究人員將上述水稻愈傷組織反復(fù)擴增后再誘導(dǎo),都以失敗告終,原因是在 多次繼代培養(yǎng)
多次繼代培養(yǎng)
后喪失細(xì)胞全能性的表達能力。