青霉素V是早期使用的一種青霉素類抗生素．經(jīng)常利用青霉素V?；杆馇嗝顾豓鉀鹽來獲得重要的抗生素產(chǎn)品。從某種更高酶活力的青霉素V酰化酶基因突變體中用PCR法提取青霉素V酰化酶基因（pva-wt），與表達載體pET30a構(gòu)建重組表達載體pET30a-pva-wt,過程如圖所示，再將重組表達載體轉(zhuǎn)化入E?coliBL21，從而獲得工程菌。圖中ori為復制原點，Kan為卡那霉素抗性基因。回答下列問題：
（1）利用PCR技術(shù)獲得pva-wt的過程中，需要在PCR反應體系中加入引物、四種脫氧核苷酸、緩沖溶液及 pva-wt和耐高溫的DNA聚合酶pva-wt和耐高溫的DNA聚合酶，緩沖溶液中還需加入Mg2+的作用是 激活耐高溫的DNA聚合酶激活耐高溫的DNA聚合酶。
（2）pva-wt在PCR擴增的過程需要引物的原因是 耐高溫的DNA聚合酶不能從頭開始合成目的基因，而只能從引物的3′端延伸DNA鏈耐高溫的DNA聚合酶不能從頭開始合成目的基因，而只能從引物的3′端延伸DNA鏈，PCR需要兩種引物，但是引物序列不同是由于 pva-wt兩端的核苷酸序列不同且防止引物間堿基配對pva-wt兩端的核苷酸序列不同且防止引物間堿基配對，圖中，pva-wt的兩端分別添加了限制酶EcoRⅠ和XhoⅠ的識別序列，這兩個序列應分別添加在引物的 5′端5′端。
（3）構(gòu)建重組表達載體pET30a-pva-wt的過程中，需將pva-wt插在 啟動子與終止子啟動子與終止子之間，以保證目的基因能夠正常的轉(zhuǎn)錄。表達載體中的lacⅠ基因的產(chǎn)物稱為lac阻遏蛋白，阻遏蛋白可以阻遏附近基因的表達。如阻遏蛋白可以與下游基因結(jié)合，則會阻礙 RNA聚合酶RNA聚合酶與結(jié)構(gòu)基因特定位點結(jié)合從而阻斷轉(zhuǎn)錄。
（4）獲得青霉素V?；富蛲蛔凅w的過程中，科研人員利用點突變技術(shù)對pva-wt序列進行了密碼子替換，通過改變個別氨基酸來改變酶的結(jié)構(gòu)和活性，同時也進行了個別同義密碼子的替換（即不影響氨基酸序列）改造，推測其可能原因是 pva-wt序列中含有所用限制酶的識別序列pva-wt序列中含有所用限制酶的識別序列。通過化學轉(zhuǎn)化的方法將上述重組表達載體pET30a-pva-wt轉(zhuǎn)入E?coliBL21之前，需要用含某種離子的一定濃度的溶液處理細菌，使之處于一種 能吸收周圍環(huán)境中DNA分子能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】pva-wt和耐高溫的DNA聚合酶；激活耐高溫的DNA聚合酶；耐高溫的DNA聚合酶不能從頭開始合成目的基因，而只能從引物的3′端延伸DNA鏈；pva-wt兩端的核苷酸序列不同且防止引物間堿基配對；5′端；啟動子與終止子；RNA聚合酶；pva-wt序列中含有所用限制酶的識別序列；能吸收周圍環(huán)境中DNA分子
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/28 8:0:9組卷：3引用：2難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6