三氯生是一種抑菌物質，具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細胞。已知fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生。
（1）通過PCR方法獲取fabV基因時，Taq酶只能從 引物的3′端引物的3′端延伸DNA鏈，而不能從頭開始合成DNA，因此需要先根據(jù) 目的基因fabV基因兩端堿基序列目的基因fabV基因兩端堿基序列設計兩種特異性引物序列。反應體系的初始溫度設置在90～95℃的目的是 使fabV基因受熱變性后解為單鏈使fabV基因受熱變性后解為單鏈。
（2）在④步驟中，科研者需將大腸桿菌菌液利用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法接種到加有 三氯生三氯生的細菌培養(yǎng)基上，待菌落長成后，直接挑取菌落加入到PCR反應系統(tǒng)中進行基因鑒定。PCR過程中不需要先提取細菌DNA的原因是 大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌，使其釋放DNA大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌，使其釋放DNA。
（3）某科研團隊將可以受溫度調控的基因插入上述選出的重組質粒中，構建了溫度調控表達質粒（如圖2）。其中C基因在低溫下會抑制P1，R基因在高溫下會抑制P2。如果將lacZ基因和GFP基因插入圖2質粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達GFP蛋白，而高溫下只表達lacz蛋白。則lacZ基因插在 P1→T1P1→T1之間，GFP基因插在 P2→T2P2→T2之間。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】引物的3′端；目的基因fabV基因兩端堿基序列；使fabV基因受熱變性后解為單鏈；稀釋涂布平板；三氯生；大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌，使其釋放DNA；P1→T1；P2→T2
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：33引用：3難度：0.5
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1．以下是有關分離與鑒別DNA的技術，其中說法正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后電泳，請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓。實驗結果如圖2，根據(jù)實驗結果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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