三氯生是一種抑菌物質(zhì)，具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細胞。已知fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生。

（1）通過PCR方法獲取fabV基因時，Taq酶只能從

引物的3′端

引物的3′端

延伸DNA鏈，而不能從頭開始合成DNA，因此需要先根據(jù)

目的基因fabV基因兩端堿基序列

目的基因fabV基因兩端堿基序列

設(shè)計兩種特異性引物序列。反應(yīng)體系的初始溫度設(shè)置在90～95℃的目的是

使fabV基因受熱變性后解為單鏈

使fabV基因受熱變性后解為單鏈

。
（2）在④步驟中，科研者需將大腸桿菌菌液利用

稀釋涂布平板

稀釋涂布平板

法接種到加有

三氯生

三氯生

的細菌培養(yǎng)基上，待菌落長成后，直接挑取菌落加入到PCR反應(yīng)系統(tǒng)中進行基因鑒定。PCR過程中不需要先提取細菌DNA的原因是

大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌，使其釋放DNA

大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細菌，使其釋放DNA

。
（3）某科研團隊將可以受溫度調(diào)控的基因插入上述選出的重組質(zhì)粒中，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達質(zhì)粒（如圖2）。其中C基因在低溫下會抑制P₁，R基因在高溫下會抑制P₂。如果將lacZ基因和GFP基因插入圖2質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達GFP蛋白，而高溫下只表達lacz蛋白。則lacZ基因插在

P₁→T₁

P₁→T₁

之間，GFP基因插在

P₂→T₂

P₂→T₂

之間。