種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥（2n=10）進行誘變，篩選到一株種子增大的突變體。通過遺傳分析和測序，發(fā)現(xiàn)野生型DAI基因發(fā)生一個堿基G到A的替換，突變后的基因為隱性基因，據(jù)此推測突變體的表型與其有關(guān)，開展相關(guān)實驗。
回答下列問題：
（1）擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變造成，則轉(zhuǎn)基因植株的種子大小應與 野生型野生型植株的種子大小相近。
（2）用PCR反應擴增DAI基因，用限制性核酸內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物和 運載體運載體進行切割，用DNA連接酶將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達，其上下游序列需具備 啟動子和終止子啟動子和終止子。
（3）轉(zhuǎn)化后，T-DNA（其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換）可在基因組單一位點插入也可以同時插入多個位點。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點插入的植株，并進一步獲得目的基因穩(wěn)定遺傳的植株（圖1）。用于后續(xù)驗證突變基因與表型的關(guān)系。
①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化T0代植株并自交，將T1代種子播種在選擇培養(yǎng)基上，能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基因組中插入了 DAI基因和卡那霉素抗性基因DAI基因和卡那霉素抗性基因。
②T1代陽性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽性率約 7575%的培養(yǎng)基中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。
③將②中選出的T2代陽性植株 自交自交（填“自交”、“與野生型雜交”或“與突變體雜交”）所得的T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽性率達到 100100%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標轉(zhuǎn)基因植株。
為便于在后續(xù)研究中檢測該突變，研究者利用PCR擴增野生型和突變型基因片段，再使用限制性核酸內(nèi)切酶X切割產(chǎn)物，通過核酸電泳即可進行突變檢測，相關(guān)信息見圖2，在圖2電泳圖中將酶切結(jié)果對應位置的條帶涂黑。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】野生型；運載體；啟動子和終止子；DAI基因和卡那霉素抗性基因；75；自交；100
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/2 8:0:9組卷：204引用：3難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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