基因定點(diǎn)整合可替換特定基因，該技術(shù)可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由某基因（A）突變引起的，將正常 A基因定點(diǎn)整合到 A基因突變的小鼠胚胎干細(xì)胞的染色體 DNA 上，替換突變基因，可用來(lái)研究該病的基因治療過(guò)程?；蚨c(diǎn)整合的過(guò)程如圖所示，已知 neor 基因可作為標(biāo)記基因，含有 neor 的細(xì)胞具有對(duì) G418的抗性。回答下列問(wèn)題：

（1）構(gòu)建重組載體，常用的工具酶有

限制酶和DNA連接酶

限制酶和DNA連接酶

。構(gòu)建重組載體時(shí)，需要大量 A基因，常用

PCR擴(kuò)增

PCR擴(kuò)增

技術(shù)合成 A基因，利用該方法合成 A基因時(shí)需要設(shè)計(jì)并合成

2

2

種引物。
（2）將重組載體導(dǎo)入患病小鼠胚胎干細(xì)胞的常用方法為

顯微注射技術(shù)

顯微注射技術(shù)

。檢測(cè)患病小鼠胚胎干細(xì)胞中是否導(dǎo)入重組載體的方法是在含有

G418

G418

的培養(yǎng)液中培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞。
（3）用圖中重組載體轉(zhuǎn)化胚胎干細(xì)胞時(shí)，會(huì)出現(xiàn) A基因錯(cuò)誤整合。錯(cuò)誤整合時(shí)，重組載體上的兩個(gè)HSV-tk 至少會(huì)有一個(gè)與neor 一起整合到染色體 DNA 上。已知 HSV-tk1、HSV-tk2 的產(chǎn)物都把DHPG 轉(zhuǎn)化成有毒物質(zhì)而使細(xì)胞死亡。將導(dǎo)入重組載體胚胎干細(xì)胞置于同時(shí)含有 G418 和 DHPG 的培養(yǎng)，存活下來(lái)的是 

正確整合

正確整合

（填“正確整合”或“錯(cuò)誤整合”）的胚胎干細(xì)胞。