COR基因是植物的抗寒基因。CBF基因控制合成的轉(zhuǎn)錄因子，CBF能特異性結(jié)合COR基因啟動(dòng)子區(qū)，激活COR基因的表達(dá)。將不同植物中獲取的CBF基因和COR基因組合起來構(gòu)建抗寒基因超量表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)能提高植物的抗寒性?；卮鹣铝袉栴}：

（1）為擴(kuò)增CBF基因，應(yīng)選擇圖甲中的引物

Ⅰ和Ⅳ

Ⅰ和Ⅳ

，經(jīng)過四次循環(huán)形成的產(chǎn)物中同時(shí)含有所需引物的DNA占

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。
（2）COR基因超量表達(dá)依賴于適宜的啟動(dòng)子。啟動(dòng)子有三種：各種器官中均起作用的啟動(dòng)子、特定器官中起作用的啟動(dòng)子、特定條件誘導(dǎo)的啟動(dòng)子。多種類型啟動(dòng)子可組合使用。從減少物質(zhì)和能量消耗的角度出發(fā)，最好選擇

特定器官中起作用的和特定條件誘導(dǎo)

特定器官中起作用的和特定條件誘導(dǎo)

的啟動(dòng)子，使馬鈴薯塊莖在寒冷刺激下才啟動(dòng)COR基因的表達(dá)。轉(zhuǎn)錄因子CBF特異性識別下游靶基因啟動(dòng)子區(qū)后，可能與

RNA聚合

RNA聚合

酶結(jié)合形成復(fù)合體從而激活COR基因的表達(dá)。
（3）當(dāng)遇到平末端和黏性末端不能連接時(shí)，可利用限制酶Klenow酶特有的5′→3′DNA聚合酶活性，將黏性末端補(bǔ)平后再與平末端連接。根據(jù)圖乙分析，構(gòu)建抗寒基因超量表達(dá)載體時(shí)，為實(shí)現(xiàn)經(jīng)XbaⅠ切割后的CBF基因與COR基因表達(dá)載體的連接，應(yīng)選用的限制酶是

SamI、Klenow酶

SamI、Klenow酶

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（4）已知A基因表達(dá)產(chǎn)物能參與核孔復(fù)合體的形成影響RNA運(yùn)出核，在植物抗寒過程中發(fā)揮重要的作用?？茖W(xué)家從抗寒轉(zhuǎn)基因植物中篩選到一個(gè)A基因突變的植株（a突變體）。研究發(fā)現(xiàn)，a突變體中CBF基因的表達(dá)水平降低。由此推斷a突變體抗寒能力

減弱

減弱

（填“提高”或“減弱”），其機(jī)理是

a突變體中A基因表達(dá)產(chǎn)物減少，影響核孔復(fù)合體的形成，導(dǎo)致CBF基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA無法轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞核，轉(zhuǎn)錄因子CBF減少，使得COR基因的表達(dá)水平明顯降低，產(chǎn)生保護(hù)細(xì)胞免受凍害的親水性多肽減少，植物抗寒能力減弱

a突變體中A基因表達(dá)產(chǎn)物減少，影響核孔復(fù)合體的形成，導(dǎo)致CBF基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA無法轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞核，轉(zhuǎn)錄因子CBF減少，使得COR基因的表達(dá)水平明顯降低，產(chǎn)生保護(hù)細(xì)胞免受凍害的親水性多肽減少，植物抗寒能力減弱

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