新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通過(guò)與人體黏膜細(xì)胞表面的ACE2受體結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞，是宿主抗體的重要作用位點(diǎn)。如圖1是科研人員利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受體結(jié)合域RBD基因作為抗原基因序列，研制新冠病毒雙抗原疫苗的技術(shù)路線。已知PCR1與PCR2要分別進(jìn)行，然后將產(chǎn)物混合，使用引物1和引物4進(jìn)行PCR3，最終獲得大量S-RBD融合基因（1500bp）。
（1）PCR3過(guò)程中，片段1與片段2連接形成S-RBD融合基因，需要使用 耐高溫的DNA聚合耐高溫的DNA聚合酶。為使S-RBD融合基因能與pX質(zhì)粒相連接，并在工程菌中表達(dá)時(shí)先合成S蛋白，則PCR1過(guò)程中，應(yīng)在引物1的5′端添加的限制酶序列是 5′CATATG3′5′CATATG3′。
（2）為初步檢測(cè)過(guò)程B構(gòu)建是否成功，用EcoRⅠ、NdeⅠ、HindⅢ對(duì)重組pX系列質(zhì)粒進(jìn)行完全酶切，然后對(duì)重組pX系列質(zhì)粒及其酶切產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖2。據(jù)圖可知，重組質(zhì)粒pX2和pX5構(gòu)建成功的依據(jù)是 重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段堿基對(duì)總和等于S—RBD融合基因長(zhǎng)度1500bp重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段堿基對(duì)總和等于S—RBD融合基因長(zhǎng)度1500bp。
（3）在工程菌的篩選時(shí)，可先后用兩種抗生素進(jìn)行影印培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（即使用無(wú)菌的絨氈布?jí)涸谂囵B(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上），在培養(yǎng)基B中存活的菌落是否含有目的基因 否否（填“是”或“否”）。鑒定重組pX質(zhì)粒是否導(dǎo)入工程菌還可以采用的方法是 觀察菌落是否具有熒光觀察菌落是否具有熒光。
（4）試從免疫學(xué)角度分析此種雙抗原疫苗比常規(guī)S蛋白疫苗更具優(yōu)勢(shì)的原因 此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】耐高溫的DNA聚合；5′CATATG3′；重組質(zhì)粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段堿基對(duì)總和等于S—RBD融合基因長(zhǎng)度1500bp；否；觀察菌落是否具有熒光；此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結(jié)合域RBD，有利于進(jìn)入靶細(xì)胞，從而激發(fā)細(xì)胞免疫
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/10/26 12:30:1組卷：15引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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