利用基因工程技術培育出油脂高產的四尾柵藻，是獲取生物柴油的新途徑?？茖W家欲從紫蘇中提取DGAT1基因（催化油脂合成的關鍵酶基因），導入到四尾柵藻細胞，獲得轉基因油脂高產的四尾柵藻，流程如圖。質粒pCAMBIA與PCR擴增出的DGAT1的酶切位點如圖所示（圖1）?，F(xiàn)有BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ三種限制性內切核酸酶，它們識別并切割的堿基序列如下表，請回答下列問題：

BamHⅠ	5′G↓GATCC3′
BglⅡ	5′A↓GATCT3′
EcoRⅠ	5′G↓AATTC3′

（1）①與②過程使用的酶分別是

逆轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶

逆轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶

。
（2）將DGAT1與pCAMBLA分別用限制酶切割后進行連接可形成重組質粒，目的基因和質粒能連接成重組質粒的原因是

有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補配對

有相同的黏性末端可發(fā)生堿基互補配對

。將重組質粒導入大腸桿菌后，可向培養(yǎng)基中加入

卡那霉素

卡那霉素

篩選出導入質粒的大腸桿菌。
（3）篩選出的重組質粒存在DGAT1基因，但DGAT1在四尾柵藻細胞中表達出的肽鏈不正確，原因可能是

目的基因反向連接到質粒

目的基因反向連接到質粒

。為進一步篩選出符合要求的重組質粒，選用

EcoRI

EcoRI

限制酶對不同的重組質粒進行酶切處理，得到的電泳結果如圖所示（圖2），其中

A

A

組重組質粒為所需質粒。