將微生物接種在只缺少某種營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，再將所缺的營養(yǎng)物質(zhì)點(diǎn)植于平板上，該營養(yǎng)物質(zhì)便逐漸擴(kuò)散于植點(diǎn)周圍。該微生物若需要此種營養(yǎng)物質(zhì)，便在這種營養(yǎng)物質(zhì)擴(kuò)散處生長繁殖，形成肉眼可見的菌落圈，這種測定微生物營養(yǎng)需求的方法稱為生長譜法。某興趣小組嘗試用生長譜法測定某種大腸桿菌對(duì)糖類（碳源）的需求情況，操作流程如下：
Ⅰ.培養(yǎng)基的制備。該小組所用無碳培養(yǎng)基配方如表（加水定容至1L）：
| 成分 |
NaCl |
KH2PO4 |
K2HPO4 |
（HN4）2SO4 |
MgSO4?7H2O |
瓊脂 |
| 質(zhì)量/g |
1 |
0.5 |
0.5 |
2 |
0.2 |
20 |
同時(shí)配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖溶液各50mL
Ⅱ.將大腸桿菌懸液與溶化并冷卻至50℃的固體培養(yǎng)基混勻，倒平板。
Ⅲ.將已凝固的平板背面用記號(hào)筆劃分為四個(gè)區(qū)，并注明要點(diǎn)植的糖類名稱。
Ⅳ.通過無菌操作分別加入蘸有不同糖類的無菌濾紙片，待平板吸收干燥后倒置培養(yǎng)24小時(shí)。
結(jié)合所學(xué)知識(shí)，回答下列問題：
（1）無碳培養(yǎng)基配方中加入（NH
4）
2SO
4的目的是
提供氮源（供微生物合成含氮有機(jī)物）
提供氮源（供微生物合成含氮有機(jī)物）
。對(duì)培養(yǎng)基及糖溶液通常采用的滅菌方法是
高壓蒸汽滅菌
高壓蒸汽滅菌
。倒平板后用
稀釋涂布平板
稀釋涂布平板
法進(jìn)行接種。
（2）該小組發(fā)現(xiàn)最終在培養(yǎng)基的四個(gè)區(qū)內(nèi)均有菌落圈產(chǎn)生，但大小不同，據(jù)此得到的初步結(jié)論是
大腸桿菌可以利用四種糖類（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖）作為碳源，但利用的程度不同
大腸桿菌可以利用四種糖類（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖）作為碳源，但利用的程度不同
。
（3）生長譜法還可用于某些營養(yǎng)缺陷型菌株（失去合成某種生長因子能力的菌株）的篩選和鑒定，例如大腸桿菌經(jīng)紫外線誘變處理后會(huì)產(chǎn)生一些營養(yǎng)缺陷型突變個(gè)體，現(xiàn)已純化并制備出某營養(yǎng)缺陷型的菌懸液，但不清楚是氨基酸缺陷型、維生素缺陷型還是氨基酸-維生素缺陷型，某生物興趣小組用生長譜法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定，請將他們的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)補(bǔ)充完整。
實(shí)驗(yàn)思路：將菌懸液與溶化并冷卻至50℃的不含氨基酸和維生素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基混勻，倒平板；將培養(yǎng)基劃分成兩個(gè)相等的區(qū)域A、B；A區(qū)
點(diǎn)植氨基酸
點(diǎn)植氨基酸
、B區(qū)
點(diǎn)植維生素
點(diǎn)植維生素
；在適宜溫度下培養(yǎng)，觀察菌落產(chǎn)生的區(qū)域。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論：
若菌落只在A區(qū)產(chǎn)生，則為氨基酸缺陷型 若菌落只在B區(qū)產(chǎn)生，則為維生素缺陷型；若菌落產(chǎn)生在AB交界處，則為氨基酸-維生素缺陷型
若菌落只在A區(qū)產(chǎn)生，則為氨基酸缺陷型 若菌落只在B區(qū)產(chǎn)生，則為維生素缺陷型；若菌落產(chǎn)生在AB交界處，則為氨基酸-維生素缺陷型
。
