研究人員利用AFPs抗凍基因和Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒，選擇所需重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入番茄植株，培育抗凍番茄，主要操作過程如圖?？箖龇呀?jīng)低溫誘導(dǎo)后可溶性蛋白均比對照明顯增加，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可檢測到可溶性蛋白的C區(qū)和B區(qū)染色加深。已知三種限制酶的識別序列及酶切位點(diǎn)如表所示。請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BglⅡ	EcoRⅠ
識別序列及酶切位點(diǎn)	-G↓GATCC-	-A↓GATCT-	-G↓AATTC-

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選擇

BamHⅠ

BamHⅠ

、

BglⅡ

BglⅡ

（酶）分別切割質(zhì)粒和含AFPs抗凍基因的外源DNA。
（2）培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，常選擇Ti質(zhì)粒作為目的基因載體的原因是

Ti質(zhì)粒上有T-DNA，可將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞染色體DNA上

Ti質(zhì)粒上有T-DNA，可將外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞染色體DNA上

。將導(dǎo)入了表達(dá)載體的農(nóng)桿菌與取自番茄的細(xì)胞共同培養(yǎng)，通過農(nóng)桿菌的

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

作用就可使目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞，為篩選成功導(dǎo)入抗凍基因的番茄細(xì)胞，需在培養(yǎng)基中添加

卡那霉素

卡那霉素

。通過過程④獲得完整的植株，依據(jù)的原理是

植物細(xì)胞的全能性

植物細(xì)胞的全能性

。與常規(guī)的種子繁殖方法相比，利用該技術(shù)培育抗凍番茄植株的優(yōu)點(diǎn)是

打破了常規(guī)育種中難以突破的種間界限。實(shí)現(xiàn)了不同物種間的基因交流，從而大幅度的改良植物的遺傳特性

打破了常規(guī)育種中難以突破的種間界限。實(shí)現(xiàn)了不同物種間的基因交流，從而大幅度的改良植物的遺傳特性

。
（3）可通過聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測經(jīng)低溫誘導(dǎo)后抗凍番茄植株中的可溶性蛋白，若

可溶性蛋白的C區(qū)和B區(qū)染色加深

可溶性蛋白的C區(qū)和B區(qū)染色加深

，則表明AFPs基因已表達(dá)出相應(yīng)的蛋白質(zhì)；也可采用

低溫處理番茄植株，并與非轉(zhuǎn)基因植物對照

低溫處理番茄植株，并與非轉(zhuǎn)基因植物對照

進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測。