四尾柵藻具有環(huán)境適應能力強和生長速度快等優(yōu)點，如果能將其進行品種改良，提高含油量，有望解決微藻生物柴油產(chǎn)業(yè)化進程的瓶頸。研究人員利用基因工程技術(shù)將油料作物紫蘇DGAT1基因?qū)胨奈矕旁?，獲得轉(zhuǎn)基因的產(chǎn)油微藻，利用地熱廢水培養(yǎng)，不僅能生產(chǎn)生物柴油，還能治理地熱廢水。操作過程如下圖，請回答下列問題：
注：LacZ基因編碼產(chǎn)生的酶可以分解物質(zhì)X-gal,從而使菌落顯現(xiàn)出藍色。若無該基因或該基因被破壞，則菌落呈白色。

（1）將質(zhì)粒pMD19-DGAT1導入大腸桿菌前，通常先用Ca²⁺處理大腸桿菌，使細胞處于一種

能吸收周圍環(huán)境中DNA分子

能吸收周圍環(huán)境中DNA分子

的生理狀態(tài)。
（2）圖中接種大腸桿菌的培養(yǎng)基pH一般為

中性或弱堿性

中性或弱堿性

。為了便于重組質(zhì)粒的篩選，該選擇培養(yǎng)基中應添加

氨芐青霉素和X-gal

氨芐青霉素和X-gal

。導入

沒有連接目的基因的質(zhì)粒（或空質(zhì)粒；或pMD19質(zhì)粒）

沒有連接目的基因的質(zhì)粒（或空質(zhì)粒；或pMD19質(zhì)粒）

的大腸桿菌菌落成藍色，導入

重組質(zhì)粒（或pMD19-DGAT1質(zhì)粒）

重組質(zhì)粒（或pMD19-DGAT1質(zhì)粒）

的大腸桿菌菌落成白色。
（3）由上圖推測，用

BamHⅠ

BamHⅠ

和

XbaⅠ

XbaⅠ

酶切割pMD19-DGAT1獲得 DGAT1基因，并與酶切后的載體pBI121連接再次構(gòu)建基因表達載體，用這兩種酶切割的目的是

保證其準確插入質(zhì)粒并防止其出現(xiàn)自身環(huán)化等問題（或防止反向連接和自身環(huán)化）

保證其準確插入質(zhì)粒并防止其出現(xiàn)自身環(huán)化等問題（或防止反向連接和自身環(huán)化）

。
（4）為檢測轉(zhuǎn)基因四尾柵藻對地熱廢水的去污能力，研究人員設計實驗并得到相應實驗結(jié)果如表。

指標	總氮（mg/L）	總磷（mg/L）	氟化物（mg/L）
廢水培養(yǎng)基	23.2	4.32	4.56
培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因四尾柵藻11天后	1.9	0.45	0.84

該實驗不能說明轉(zhuǎn)DGAT1基因顯著提高了四尾柵藻的去污能力。請進一步完善實驗設計

應添加對照組：廢水培養(yǎng)非轉(zhuǎn)基因四尾柵藻11天后，檢測總氮、總磷和氟化物的含量

應添加對照組：廢水培養(yǎng)非轉(zhuǎn)基因四尾柵藻11天后，檢測總氮、總磷和氟化物的含量

。