科研人員培育了一種能夠降解餐廚廢棄物并生成乳酸的轉(zhuǎn)基因畢赤酵母?；舅悸肥窃谌樗崦摎涿富颍↙DH）的單基因表達載體中逐個接入糖化酶基因（Ga）表達盒與α-淀粉酶基因（Amy）表達盒，構(gòu)建出AGL—三基因表達載體，如圖1所示。

（1）利用PCR技術(shù)獲得目的基因的過程中，需要在PCR反應(yīng)體系中加入模板、Taq酶及

引物和四種游離的脫氧核苷酸

引物和四種游離的脫氧核苷酸

。
（2）將圖1所示結(jié)構(gòu)“導(dǎo)入”畢赤酵母后，將畢赤酵母轉(zhuǎn)移至含

博來霉素

博來霉素

的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，篩選出能夠生存的菌落。
（3）對篩選出的菌株進行個體水平鑒定的方法是

將其接種至餐廚廢棄物中，定時測定乳酸的含量

將其接種至餐廚廢棄物中，定時測定乳酸的含量

，利用轉(zhuǎn)基因畢赤酵母降解餐廚廢棄物生成乳酸，優(yōu)點有

既減少了環(huán)境污染，也降低了乳酸的生產(chǎn)成本

既減少了環(huán)境污染，也降低了乳酸的生產(chǎn)成本

。
（4）構(gòu)建三基因表達載體的難點在于構(gòu)建目的基因的表達盒，圖2為Amy表達盒的構(gòu)建過程。（pro為啟動子；AOX TT為終止子；Bsp119Ⅰ、XbaⅠ、BglⅡ、BamHⅠ為不同限制酶，①②為操作過程。）操作①的處理是

將質(zhì)粒1與α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ與XbaⅠ兩種限制酶處理

將質(zhì)粒1與α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ與XbaⅠ兩種限制酶處理

，然后用DNA連接酶拼接。在此之前，科研人員還利用點突變技術(shù)對α-淀粉酶基因序列進行了同義密碼子替換（即不影響氨基酸序列）改造，推測其原因是

α-淀粉酶基因序列中含有所用限制酶的識別序列

α-淀粉酶基因序列中含有所用限制酶的識別序列

。操作②中必需用

BglⅡ、BamHⅠ

BglⅡ、BamHⅠ

酶對質(zhì)粒2處理，才能獲得能正常表達的α-淀粉酶基因表達盒。