二十碳五烯酸（EPA）能促進(jìn)體內(nèi)飽和脂肪酸代謝，是人體自身不能直接從頭合成但又不可缺少的營(yíng)作物質(zhì)。獲取EPA產(chǎn)品的主要途徑是從魚油等海洋漁業(yè)資源中提取。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)從海洋細(xì)菌中提取了EPA合成途徑的關(guān)鍵基因pfaB，并將其導(dǎo)入酵母菌內(nèi)，通過(guò)酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)EPA，相關(guān)過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）利用PCR擴(kuò)增pfaB基因前，需設(shè)計(jì)引物 ①④①④（填序號(hào)），在第 三三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段（pfaB基因）。
（2）利用PCR擴(kuò)增pfaB基因時(shí)，需將溫度上升到90℃后再降溫至50℃，其目的是 使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合。將pfaB基因連接在pPIC9質(zhì)粒上時(shí)所用的酶是 DNA連接酶（和限制酶）DNA連接酶（和限制酶）。
（3）將pfaB-pPIC9表達(dá)載體導(dǎo)入酵母菌前，需先將表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌并進(jìn)行篩選，篩選時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)加入 氨芐青霉素氨芐青霉素，再將含有表達(dá)載體的大腸桿菌與酵母菌置于電轉(zhuǎn)杯中，通過(guò)電激將大腸桿菌導(dǎo)入酵母菌，該表達(dá)載體在酵母菌中不會(huì)隨著酵母菌繁殖而丟失的原因是 表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合；DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】①④；三；使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合；DNA連接酶（和限制酶）；氨芐青霉素；表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：2難度：0.6
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1．紅細(xì)胞生成素（EPO）是人體內(nèi)促進(jìn)紅細(xì)胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然 EPO來(lái)源極為有限，某科研團(tuán)隊(duì)采用基因工程培育轉(zhuǎn)基因羊作為乳腺生物反應(yīng)器，使其能合成EPO。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
2．煙草是我國(guó)一些地區(qū)的經(jīng)濟(jì)作物之一，提高煙草質(zhì)量有利于提高經(jīng)濟(jì)收入。我國(guó)科研團(tuán)隊(duì)研究了一種轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種，抗鹽基因的結(jié)構(gòu)和獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程（①～⑤）如圖所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過(guò)程（填序號(hào)）。過(guò)程②③采用的方法是。
（4）⑤過(guò)程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過(guò)程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
3．如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，如圖為某種質(zhì)粒和目的基因，箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)?，F(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中，以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說(shuō)法正確的是（ ?。?
限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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