乙肝病毒（HBV）的基因X是乙肝病毒復(fù)制和擴(kuò)散所必需的基因，在乙肝慢性化和肝癌的發(fā)生中具有重要作用，如圖是乙型肝炎病毒的X基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在畢赤酵母中的表達(dá)過(guò)程，圖中所示PUCori為質(zhì)粒復(fù)制原點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）酵母是低等真核生物，除了具有細(xì)胞生長(zhǎng)快，易于培養(yǎng)，遺傳操作簡(jiǎn)單等原核生物具有的特點(diǎn)外，又具有真核生物表達(dá)蛋白質(zhì)后進(jìn)行的

加工、修飾、合理的空間折疊

加工、修飾、合理的空間折疊

等功能。畢赤酵母菌的質(zhì)粒帶有Zeo基因（博來(lái)霉素抗性基因）可作為基因工程中的

標(biāo)記

標(biāo)記

基因，用PCR方法擴(kuò)增X基因序列，此過(guò)程需要

DNA聚合酶

DNA聚合酶

酶的催化，并分別在上下游引入

XbaⅠ和XhoⅠ

XbaⅠ和XhoⅠ

酶切位點(diǎn)。
（2）雙酶切目的基因X與載體，可避免

目的基因和載體自連以及目的基因和載體反向連接

目的基因和載體自連以及目的基因和載體反向連接

，再用

DNA連接酶

DNA連接酶

酶可構(gòu)建得到HBVX蛋白畢赤酵母表達(dá)載體。將畢赤酵母經(jīng)山梨醇處理成

感受態(tài)

感受態(tài)

細(xì)胞后，把該表達(dá)載體導(dǎo)入畢赤酵母細(xì)胞內(nèi)，可先用

博來(lái)霉素

博來(lái)霉素

進(jìn)行篩選后再進(jìn)行基因X的檢測(cè)和鑒定，采用

DNA分子雜交

DNA分子雜交

技術(shù)，用

同位素標(biāo)記的目的基因X

同位素標(biāo)記的目的基因X

做探針，若結(jié)果顯示了雜交帶，表明目的基因X進(jìn)入了畢赤酵母細(xì)胞內(nèi)；經(jīng)過(guò)

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

技術(shù)結(jié)果顯示含有重組畢赤酵母可以分泌表達(dá)X蛋白。