人呼吸道合胞病毒(HRSV)是一種單鏈RNA病毒,圖1是構(gòu)建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖,如表是相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點,請回答:
限制酶 | BclⅠ | EcoRⅠ | XbaⅠ | Sau3AⅠ | BamHⅠ |
識別序列及切割位點 | T↓GATCA | G↓AATTC | T↓CTAGA | ↓GATC | G↓GATCC |
RNA聚合酶
RNA聚合酶
的催化下合成+RNA。(2)過程②設(shè)計引物時在兩種引物的5′端分別添加
Xba I和BamH I
Xba I和BamH I
酶的識別序列。過程③需要用 Xba I和 Bcl I
Xba I和 Bcl I
酶切割質(zhì)粒A。(3)過程④將質(zhì)粒B導(dǎo)入大腸桿菌,有利于
質(zhì)粒B準確復(fù)制,穩(wěn)定保存,方便提取
質(zhì)粒B準確復(fù)制,穩(wěn)定保存,方便提取
,需要用 CaCl2(Ca2+)
CaCl2(Ca2+)
處理大腸桿菌。(4)為制備減毒突變株,科研人員將單個突變堿基引入HRSV基因組cDNA質(zhì)??寺≈校鞒倘鐖D2。已知在細菌體內(nèi)合成的DNA分子有甲基化修飾,通過PCR擴增的DNA鏈無甲基化修飾。
①DpnⅠ識別甲基化的GATC四個堿基序列,因此其能將
a、b鏈
a、b鏈
水解消化掉。在大腸桿菌細胞內(nèi)完成缺刻修復(fù)需要 DNA連接
DNA連接
酶。②已知質(zhì)粒B為a個,經(jīng)過程①擴增15個循環(huán),需要突變引物
15a
15a
個,將過程②形成的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入大腸桿菌后復(fù)制n輪,得到雙鏈突變的DNA 15a?2n-1
15a?2n-1
個。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】RNA聚合酶;Xba I和BamH I;Xba I和 Bcl I;質(zhì)粒B準確復(fù)制,穩(wěn)定保存,方便提??;CaCl2(Ca2+);a、b鏈;DNA連接;15a;15a?2n-1
【解答】
【點評】
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