人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一種單鏈RNA病毒，圖1是構(gòu)建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖，如表是相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，請(qǐng)回答：

限制酶	BclⅠ	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAGA	↓GATC	G↓GATCC

（1）HRSV的基因組為-RNA，入侵細(xì)胞后在

RNA聚合酶

RNA聚合酶

的催化下合成+RNA。
（2）過程②設(shè)計(jì)引物時(shí)在兩種引物的5′端分別添加

Xba I和BamH I

Xba I和BamH I

酶的識(shí)別序列。過程③需要用

Xba I和 Bcl I

Xba I和 Bcl I

酶切割質(zhì)粒A。
（3）過程④將質(zhì)粒B導(dǎo)入大腸桿菌，有利于

質(zhì)粒B準(zhǔn)確復(fù)制，穩(wěn)定保存，方便提取

質(zhì)粒B準(zhǔn)確復(fù)制，穩(wěn)定保存，方便提取

，需要用

CaCl₂（Ca²⁺）

CaCl₂（Ca²⁺）

處理大腸桿菌。
（4）為制備減毒突變株，科研人員將單個(gè)突變堿基引入HRSV基因組cDNA質(zhì)?？寺≈?，流程如圖2。已知在細(xì)菌體內(nèi)合成的DNA分子有甲基化修飾，通過PCR擴(kuò)增的DNA鏈無甲基化修飾。
①DpnⅠ識(shí)別甲基化的GATC四個(gè)堿基序列，因此其能將

a、b鏈

a、b鏈

水解消化掉。在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)完成缺刻修復(fù)需要

DNA連接

DNA連接

酶。
②已知質(zhì)粒B為a個(gè)，經(jīng)過程①擴(kuò)增15個(gè)循環(huán)，需要突變引物

15a

15a

個(gè)，將過程②形成的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入大腸桿菌后復(fù)制n輪，得到雙鏈突變的DNA

15a?2^n-1

15a?2^n-1

個(gè)。