尖孢鐮刀菌會(huì)引起黃瓜枯萎病的發(fā)生。研究人員擬從土壤中分離篩選出對黃瓜枯萎病有抑制效果的拮抗細(xì)菌（jb9 菌株），以期為黃瓜枯萎病提供生物防治。實(shí)驗(yàn)過程如圖1所示，回答下列問題：
（1）將土壤樣品制成懸浮液，步驟Ⅰ使用的接種方法是 平板劃線法平板劃線法，純化培養(yǎng)的關(guān)鍵是 無菌操作無菌操作。培養(yǎng)基 a 必備的營養(yǎng)物質(zhì)有 碳源、氮源、水和無機(jī)鹽碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。
（2）為驗(yàn)證jb9菌株的抑菌效果，需要先將尖孢鐮刀菌均勻地接種在培養(yǎng)基 b 表面，則接種方法是 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法。濾紙組作為對照組，用 無菌水無菌水處理濾紙。
（3）jb9菌株能合成分泌真菌細(xì)胞壁降解酶（HCD），抑制尖孢鐮刀菌（真菌）的生長?？蒲腥藛T將獲取的HCD基因?qū)朦S瓜細(xì)胞，培育抗枯萎病的轉(zhuǎn)基因植株。含HCD基因的DNA片段、質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及限制酶切割位點(diǎn)如圖2所示。
①根據(jù)題意，將HCD基因與圖示的質(zhì)粒重組，應(yīng)選用的限制酶是 BamHI和HindⅢ/HindⅢ和BamHIBamHI和HindⅢ/HindⅢ和BamHI。在篩選培養(yǎng)基上，要加入 氨芐青霉素氨芐青霉素來篩選含有HCD基因的受體細(xì)胞。將受體細(xì)胞培育后獲得轉(zhuǎn)基因植株。
②檢測HCD基因成功表達(dá)真菌細(xì)胞壁降解酶（HCD）的方法技術(shù)是 抗原—抗體雜交技術(shù)抗原—抗體雜交技術(shù)。
（4）為將pIgR基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切，這就要求在設(shè)計(jì)引物時(shí)，需在引物的5'端加入相應(yīng)的酶切位點(diǎn)。已知a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，引物1的5'端酶切位點(diǎn)的堿基序列為GAATTC，則引物2的5'端酶切位點(diǎn)的堿基序列為 GCGGCCGCGCGGCCGC，理由是 a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動(dòng)子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點(diǎn)a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動(dòng)子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點(diǎn)。
【考點(diǎn)】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）；基因工程的操作過程綜合．
【答案】平板劃線法；無菌操作；碳源、氮源、水和無機(jī)鹽；稀釋涂布平板法；無菌水；BamHI和HindⅢ/HindⅢ和BamHI；氨芐青霉素；抗原—抗體雜交技術(shù)；GCGGCCGC；a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動(dòng)子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點(diǎn)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/31 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.6
相似題
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1．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對其計(jì)數(shù)（如圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
2．回答下列關(guān)于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養(yǎng)基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細(xì)胞核直徑約1μm,初步推測為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細(xì)胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結(jié)構(gòu)有（多選）．
A．細(xì)胞膜 B．核糖體 C．?dāng)M核 D．莢膜
（2）表中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測定，則應(yīng)選用表中的培養(yǎng)液，針對不選用的其他培養(yǎng)液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長
②具有，會(huì)影響對SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測定結(jié)果
③缺乏，會(huì)影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進(jìn)行測定．
表 試驗(yàn)用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，并了解其生長規(guī)律，進(jìn)行了如下操作．請回答下列問題：
（1）采樣與細(xì)菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細(xì)菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細(xì)菌：將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養(yǎng)基上，待長出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長通SO2的時(shí)間，同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細(xì)菌．
（3）培養(yǎng)與觀察：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間），馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細(xì)菌的核糖體．
（4）探究生長規(guī)律：在計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法和直接計(jì)數(shù)法．在用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌，通常推測統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目．發(fā)布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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