研究者篩選到一株降解纖維素能力較強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌株（B菌），從中獲得一種纖維素酶（C1酶）基因。將C1酶基因與高效表達(dá)載體（HT質(zhì)粒）連接，再導(dǎo)入B菌，以期獲得降解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌。熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測(cè)樣本中某種DNA含量。其原理是在PCR體系中每加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針，當(dāng)Taq酶催化子鏈延伸至探針處，會(huì)水解探針，使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一次，就有一個(gè)熒光分子生成。在檢測(cè)過(guò)程中，隨著PCR的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，“雜交雙鏈”熒光信號(hào)的強(qiáng)度也等比例增加?？赏ㄟ^(guò)熒光強(qiáng)度的變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖（如圖1）。
注：DNA的轉(zhuǎn)錄方向是RNA的合成方向，即5'端到3'端。
回答下列問(wèn)題：
（1）啟動(dòng)子的基本組成單位是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸，能識(shí)別啟動(dòng)子的酶是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
（2）熒光定量PCR儀能監(jiān)測(cè)出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值），病毒核酸濃度越高，Ct值越 小小。
（3）“平臺(tái)期”出現(xiàn)的最可能的原因是 試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定循環(huán)數(shù)后，熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定循環(huán)數(shù)后，熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加。
（4）圖2中HT質(zhì)粒酶切位點(diǎn)如圖所示，C1酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，克隆C1酶基因時(shí)在其酶切位點(diǎn)1和酶切位點(diǎn)2兩端分別添加 BamHIBamHI和 SmaISmaI，并且二者順序不能調(diào)換的原因是 轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸方向是5’→3’，使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸方向是5’→3’，使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接。
（5）預(yù)期該工程菌在處理廢棄物以保護(hù)環(huán)境方面可能的應(yīng)用 降解桔桿，減少桔桿燃燒帶來(lái)的空氣污染降解桔桿，減少桔桿燃燒帶來(lái)的空氣污染。（舉一例）
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】脫氧核苷酸；RNA聚合酶；??；試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定循環(huán)數(shù)后，熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加；BamHI；SmaI；轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸方向是5’→3’，使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接；降解桔桿，減少桔桿燃燒帶來(lái)的空氣污染
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/6 8:0:9組卷：6引用：1難度：0.6
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1．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1，SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答：
（1）過(guò)程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過(guò)程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過(guò)程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫(huà)出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒(méi)有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過(guò)程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說(shuō)法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn)，說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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