1965年中國(guó)科學(xué)家人工合成了具有生物活性的結(jié)晶牛胰島素，摘取了人工合成蛋白質(zhì)的桂冠。人胰島素基因表達(dá)的最初產(chǎn)物是一條肽鏈構(gòu)成的前胰島素原，經(jīng)圖1所示的過(guò)程形成具生物活性的胰島素，此后科學(xué)家又提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素的兩種方法：AB法是根據(jù)胰島素A、B兩條肽鏈的氨基酸序列人工合成兩種DNA片段，利用工程菌分別合成兩條肽鏈后將其混合自然形成胰島素；BCA法是利用胰島B細(xì)胞中的mRNA得到胰島素基因，表達(dá)出胰島素原后再用特定酶切掉C肽段。這兩種方法使用同一種質(zhì)粒作為載體。請(qǐng)據(jù)圖分析并回答下列問(wèn)題：
（1）AB法中人工合成的兩種DNA片段均有多種可能的序列的原因是 絕大多數(shù)氨基酸都有幾個(gè)密碼子（或密碼子的簡(jiǎn)并，或一種氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子）絕大多數(shù)氨基酸都有幾個(gè)密碼子（或密碼子的簡(jiǎn)并，或一種氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子）。
（2）圖2是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過(guò)程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)。通常要將目的基因與載體結(jié)合，該過(guò)程需使用的基本工具除限制酶外還有 DNA連接酶DNA連接酶。為使目的基因與載體正確連接，在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)可添加限制酶XhoⅠ和MunⅠ的識(shí)別序列，在圖2所示的5種限制酶中選擇XhoⅠ和MunⅠ這兩種限制酶的原因是 根據(jù)圖2，對(duì)于目的基因，SalI和NheI的作用位點(diǎn)在目的基因的中間，會(huì)破壞目的基因，則在引物設(shè)計(jì)時(shí)不能選用這兩種限制酶，那么只能在XhoI和MunI和EcoRI中選擇；同時(shí)質(zhì)粒上EcoRI的其中一個(gè)作用位點(diǎn)是在標(biāo)記基因上，所以只能選擇XhoI和MunI兩種限制酶根據(jù)圖2，對(duì)于目的基因，SalI和NheI的作用位點(diǎn)在目的基因的中間，會(huì)破壞目的基因，則在引物設(shè)計(jì)時(shí)不能選用這兩種限制酶，那么只能在XhoI和MunI和EcoRI中選擇；同時(shí)質(zhì)粒上EcoRI的其中一個(gè)作用位點(diǎn)是在標(biāo)記基因上，所以只能選擇XhoI和MunI兩種限制酶。
（3）利用圖2所示的方法獲得人的胰島素基因后，需要通過(guò)PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，已知胰島素基因左端①處的堿基序列為-GGAATCAG-，則其中一種引物設(shè)計(jì)的序列是5′GGAATCAGGGAATCAG3′（不考慮限制酶識(shí)別序列）。
（4）β-半乳糖苷酶可以分解無(wú)色的X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落為白色。據(jù)此簡(jiǎn)述篩選工程菌的過(guò)程：經(jīng)鈣離子處理的大腸桿菌與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時(shí)間后，再將大腸桿菌接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌經(jīng)鈣離子處理的大腸桿菌與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時(shí)間后，再將大腸桿菌接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】絕大多數(shù)氨基酸都有幾個(gè)密碼子（或密碼子的簡(jiǎn)并，或一種氨基酸可能對(duì)應(yīng)多種密碼子）；DNA連接酶；根據(jù)圖2，對(duì)于目的基因，SalI和NheI的作用位點(diǎn)在目的基因的中間，會(huì)破壞目的基因，則在引物設(shè)計(jì)時(shí)不能選用這兩種限制酶，那么只能在XhoI和MunI和EcoRI中選擇；同時(shí)質(zhì)粒上EcoRI的其中一個(gè)作用位點(diǎn)是在標(biāo)記基因上，所以只能選擇XhoI和MunI兩種限制酶；GGAATCAG；經(jīng)鈣離子處理的大腸桿菌與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時(shí)間后，再將大腸桿菌接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/7/8 8:0:10組卷：2引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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