人們發(fā)現(xiàn)有機(jī)磷化合物能有效抑制生物體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶，從而表現(xiàn)出很好的殺蟲、滅鼠效果，但是有機(jī)磷化合物會嚴(yán)重破壞生態(tài)環(huán)境。甲基對硫磷水解酶（mph）能特異性地與有機(jī)磷化合物結(jié)合，研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)實(shí)現(xiàn)了大腸桿菌高效表達(dá)甲基對硫磷水解酶（mph），如圖1所示。請根據(jù)基因工程過程回答以下問題：

（1）構(gòu)建一株具有全細(xì)胞催化活性的大腸桿菌工程菌的關(guān)鍵步驟是要構(gòu)建pET23a-gfp-mph-r的

基因表達(dá)載體

基因表達(dá)載體

。構(gòu)建pET23a-gfp-mph-r過程中應(yīng)用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理使之成為感受態(tài)細(xì)胞。研究人員不直接將目的基因mph-r導(dǎo)入大腸桿菌的原因是

使目的基因mph-r能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)

使目的基因mph-r能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)

。
（2）圖中T7啟動子的功能為

RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)并驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA

RNA聚合酶識別和結(jié)合位點(diǎn)并驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA

。gfp作為一種融合標(biāo)簽，能很好地提高蛋白的表達(dá)量，因此還添加了TEV蛋白酶切位點(diǎn)（TEVsite），其目的是

通過TEV蛋白酶去掉gfp中融合標(biāo)簽得到大量純的mph-r蛋白

通過TEV蛋白酶去掉gfp中融合標(biāo)簽得到大量純的mph-r蛋白

。
（3）為了篩選出具有目的基因的大腸桿菌，應(yīng)將常規(guī)轉(zhuǎn)化后的菌液涂布到含

氨芐青霉素（Amp^r）

氨芐青霉素（Amp^r）

的LB固體培養(yǎng)基上。
（4）測序成功的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌用SDS-PAGE電泳檢測全細(xì)胞蛋白表達(dá)情況，如圖2所示，第4泳道為mph-r單獨(dú)表達(dá)的表達(dá)情況，第5泳道為gfp單獨(dú)表達(dá)的表達(dá)情況，請問：1至3泳道哪一個為融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白？為什么？

第1泳道，根據(jù)第4泳道m(xù)ph-r蛋白大小約35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小約30kD，融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白約為65kD，第3泳道不符合。根據(jù)題意，融合gfp標(biāo)簽后的mph-r的表達(dá)量得到顯著提高，所以蛋白表達(dá)量更大，應(yīng)為第1泳道

第1泳道，根據(jù)第4泳道m(xù)ph-r蛋白大小約35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小約30kD，融合gfp標(biāo)簽的mph-r蛋白約為65kD，第3泳道不符合。根據(jù)題意，融合gfp標(biāo)簽后的mph-r的表達(dá)量得到顯著提高，所以蛋白表達(dá)量更大，應(yīng)為第1泳道

。