近年來(lái)，基因工程、蛋白質(zhì)工程等的廣泛應(yīng)用給發(fā)酵工程制藥領(lǐng)域的發(fā)展注入了強(qiáng)勁動(dòng)力。人們可以采用基因工程的方法，將藥物蛋白基因轉(zhuǎn)移到微生物中，獲得具有某種藥物生產(chǎn)能力的微生物?？蒲腥藛T嘗試構(gòu)建SH/G融合蛋白表達(dá)載體，并導(dǎo)入受體細(xì)胞表達(dá)和分泌。H為目的基因編碼的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分泌依賴(lài)于信號(hào)肽的引導(dǎo)，用信號(hào)肽S代替H自身信號(hào)肽有利于蛋白質(zhì)的分泌，G基因片段（長(zhǎng)度為717bp）編碼的一段小肽常作為融合蛋白標(biāo)簽。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）在基因工程中作為載體的質(zhì)粒應(yīng)具備的基本條件有

在受體細(xì)胞中復(fù)制（或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制）、具有標(biāo)記基因、有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)

在受體細(xì)胞中復(fù)制（或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制）、具有標(biāo)記基因、有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)

（至少答出2點(diǎn)）。為了使目的基因

表達(dá)和發(fā)揮作用

表達(dá)和發(fā)揮作用

，需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為了滿(mǎn)足需要，會(huì)在載體中人工構(gòu)建誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，當(dāng)誘導(dǎo)物存在時(shí)可以激活或抑制

目的基因的表達(dá)

目的基因的表達(dá)

。
（2）利用PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)，應(yīng)選擇圖中的引物

b、c

b、c

：若目的基因經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增n次，需要的引物數(shù)量至少是

2ⁿ⁺¹-2

2ⁿ⁺¹-2

。PCR的產(chǎn)物，常采用

瓊脂糖凝膠電泳

瓊脂糖凝膠電泳

法鑒定。
（3）要構(gòu)建S/HG融合蛋白表達(dá)載體，應(yīng)選擇圖中限制酶

EcoRV

EcoRV

來(lái)切割質(zhì)粒。若目的基因與質(zhì)粒按圖示方向正向連接，用BamHI和Sacl同時(shí)切割重組后的基因表達(dá)載體，完全酶切后的產(chǎn)物的長(zhǎng)度約為

5480、1061

5480、1061

bp。
（4）該基因工程中的受體細(xì)胞無(wú)任何抗生素抗性，某同學(xué)用只含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞，這樣處理不能成功的原因是

導(dǎo)入質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒的受體細(xì)胞都具有氨芐青霉素抗性，都能正常生長(zhǎng)

導(dǎo)入質(zhì)?；蛑亟M質(zhì)粒的受體細(xì)胞都具有氨芐青霉素抗性，都能正常生長(zhǎng)

。