植物內(nèi)生菌是指能夠定殖在植物細胞間隙或細胞內(nèi)，并與植物建立共生關(guān)系的一類微生物。
（1）幾乎所有植物中都有內(nèi)生菌的存在，許多植物離開了內(nèi)生菌甚至不能存活，這是長期

自然選擇

自然選擇

的結(jié)果。根瘤菌屬于豆科植物的內(nèi)生菌，請簡要說明兩者的互利關(guān)系：

根瘤菌會將空氣里的氮氣轉(zhuǎn)化成植物可以吸收并利用的含氮物質(zhì)，而豆科植物為根瘤菌提供有機物

根瘤菌會將空氣里的氮氣轉(zhuǎn)化成植物可以吸收并利用的含氮物質(zhì)，而豆科植物為根瘤菌提供有機物

。
（2）放線菌也是一種常見的內(nèi)生菌，能抑制病原菌的生長。研究者利用兩種不同類型的放線菌獲得新型工程菌，過程如圖1：

①收集上述兩種菌絲體，加入

溶菌酶

溶菌酶

（填“纖維素酶”或“溶菌酶”）酶解，分離原生質(zhì)體，置于

等滲溶液

等滲溶液

中以維持細胞形態(tài)備用。
②將兩種原生質(zhì)體懸液等量混合，加入適量促融劑

PEG（聚乙二醇）

PEG（聚乙二醇）

處理一段時間。終止反應(yīng)并洗滌后，取一定量混合液接種于

固體

固體

（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基，恒溫培養(yǎng)。根據(jù)菌落特征，選出性狀穩(wěn)定的融合菌株。
③先將

病原菌

病原菌

接種于固體培養(yǎng)基上備用，再將篩選出的融合菌株分別接種到上述培養(yǎng)基中，每種處理重復(fù)3次，測定結(jié)果取

平均

平均

值，計算融合菌株對病原菌的抑制率。
（3）某酵母菌能分泌一種可高效降解纖維素的酶，這種酶由W基因編碼。為在放線菌中表達W基因，需以圖2中質(zhì)粒為載體。W基因以乙鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸的方向為

5'→3'

5'→3'

。
①很多啟動子具有物種特異性，在質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動子應(yīng)選擇

C

C

（填寫字母）。
A．酵母菌啟動子
B．芽孢桿菌啟動子
C．放線菌啟動子
②應(yīng)使用限制酶

MfeⅠ、HindⅢ

MfeⅠ、HindⅢ

切割圖中質(zhì)粒，使用限制酶

EcoRⅠ、HindⅢ

EcoRⅠ、HindⅢ

切割圖中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達W基因的重組質(zhì)粒。
（4）利用PCR技術(shù)對放線菌是否含有W基因進行

分子

分子

水平鑒定，應(yīng)根據(jù)目的基因（W基因）兩端的堿基序列來設(shè)計

引物

引物

進行擴增。
（5）檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因放線菌不能產(chǎn)生有活性的纖維素酶，根據(jù)細胞結(jié)構(gòu)分析，可能的原因是

放線菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法（不能）對纖維素酶進行加工

放線菌沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法（不能）對纖維素酶進行加工

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