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綠色熒光蛋白(GFP)是水母體內的一種發(fā)光蛋白,其編碼基因可作為基因工程中載體上的標記基因。研究人員在pBIN19質粒的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)內部插入GFP基因和CaMV35S(強啟動子)構建成可用于培育轉基因植物的質粒載體pBIN-35S-GFP(如圖所示)?;卮鹣铝袉栴}:
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注:質粒上“LB→……←RB”片段為T-DNA片段,Kmr基因為卡那霉素抗性基因,質粒上限制酶的識別序列省略未標出。
(4)構建pBIN-35S-GFP載體的過程中需要用到
限制酶和DNA連接
限制酶和DNA連接
酶,要插入CaMV35S的目的是
啟動GFP基因的表達
啟動GFP基因的表達
,因此CaMV35S需插入到GFP基因的
上游
上游
。
(5)已知β-半乳糖苷酶能將無色的X-gal分解為半乳糖和藍色的5-溴-4-氯靛藍。把GFP基因和CaMV35S插入到LacZ基因的內部,除了通過菌落是否產生綠色熒光來篩選導入質粒pBIN-35S-GFP外,還可以通過添加了
卡那霉素和X-gal
卡那霉素和X-gal
培養(yǎng)基,菌落顏色呈
色的就是導入了質粒pBIN-35S-GFP的受體菌的克隆。
(6)若用pBIN-35S-GFP載體采用農桿菌轉化法進行植物轉基因操作,外植體轉化完成后常用抗生素進行除菌。若利用PCR技術判定農桿菌是否已經除盡,可根據(jù)
oriV或oriT或Kmr
oriV或oriT或Kmr
(填圖中質粒片段名稱)基因的序列設計引物,對PCR的產物進行凝膠電泳,若
無PCR產物條帶
無PCR產物條帶
,說明外植體中已無農桿菌殘留。
(7)綠色熒光蛋白基因可作為基因工程中載體上的標記基因。綠色熒光蛋白則可用于研究蛋白質在細胞中的定位,原因除了綠色熒光蛋白能夠發(fā)熒光外,還有一重要原因是GFP結合到被研究的目的蛋白的末端,不影響該蛋白的
生物學活性
生物學活性
,還是按照無GFP結合的蛋白同樣的路徑運轉。要使GFP結合到目的蛋白的末端,構建重組質粒時目的基因、GFP基因、CaMV35S的連接順序為
CaMV35S→目的基因→GFP基因
CaMV35S→目的基因→GFP基因
(用“→”回答)。

【答案】限制酶和DNA連接;啟動GFP基因的表達;上游;卡那霉素和X-gal;白;oriV或oriT或Kmr;無PCR產物條帶;生物學活性;CaMV35S→目的基因→GFP基因
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有,未經書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:10引用:2難度:0.6
相似題
  • 1.下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是(  )

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
  • 2.幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分,幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內,可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題:
    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得?;蛭膸彀?
     
     

    (2)生物體細胞內的DNA復制開始時,解開DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術擴增目的基因時,使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的
     
    。
    (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學鍵是
     
    。
    (4)提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     
    。
    (5)若獲得的轉基因植株(幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     
    。

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
  • 3.下列有關基因工程的敘述,正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/12/31 5:0:5組卷:3引用:2難度:0.7
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