稻田生物固氮作用是稻田氮素循環(huán)的關鍵環(huán)節(jié)，某些藍細菌是自生固氮菌（獨立生活時能夠利用空氣中游離的氮分子作為氮源，并將氮分子轉化為氨，氨轉化為銨鹽后是植物良好的氮素營養(yǎng)）。藍細菌中B基因表達的B蛋白是一種有助于藍細菌高效吸收的載體蛋白，科學家利用基因工程和細胞工程等技術，嘗試將藍細菌的B基因導入水稻細胞，以期獲得吸收能力較強的轉基因水稻，從而增加糧食產量。圖1、2分別是農桿菌的T質粒和藍細菌B基因的結構模式圖?；卮鹣铝杏嘘P問題：

（1）為獲得可用于進一步研究的固氮藍細菌的菌株，該培養(yǎng)基所需的營養(yǎng)物質有無機碳源、

水、無機鹽

水、無機鹽

（寫兩種），但不需要添加

氮源

氮源

營養(yǎng)物質，并在有光條件下培養(yǎng)。
（2）利用PCR技術以圖2中的DNA片段為模板擴增B基因時，需要的引物有

引物B和引物C

引物B和引物C

（填寫圖中引物代號）。
（3）在構建含B基因的表達載體時，需要用限制酶

BclⅠ和HindⅢ

BclⅠ和HindⅢ

切割Ti質粒和B基因，不選用其他限制酶的原因是

BamHⅠ會破壞四環(huán)素抗性基因（和氨芐青霉素抗性基因），Sau3AⅠ不能切割Ti質粒

BamHⅠ會破壞四環(huán)素抗性基因（和氨芐青霉素抗性基因），Sau3AⅠ不能切割Ti質粒

。實踐中，雙酶切與單酶切相比，優(yōu)點是

防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及質粒和目的基因的反向連接

防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及質粒和目的基因的反向連接

。
（4）為檢測B基因在轉基因水稻細胞中是否成功表達，可采用抗原一抗體雜交法在分子水平上檢測，還可以在個體水平上檢測，請寫出個體水平檢測的實驗思路：

將等量的生長狀態(tài)相同的普通水稻和轉基因水稻，分別置于含相同濃度的

NO

-

3

完全培養(yǎng)液中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測并比較兩組培養(yǎng)液中

NO

-

3

的剩余量（或測定兩組水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

將等量的生長狀態(tài)相同的普通水稻和轉基因水稻，分別置于含相同濃度的

NO

-

3

完全培養(yǎng)液中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測并比較兩組培養(yǎng)液中

NO

-

3

的剩余量（或測定兩組水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

。