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三氯生是一種抑苗物質(zhì)，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細胞。2021年某科研團隊通過先篩選出一種對三氯生抵抗性較強的重組質(zhì)粒，再將可以受溫度調(diào)控的基因插入該質(zhì)粒上，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達質(zhì)粒。
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（1）圖1中，步驟Ⅰ需要的工具酶是
限制酶和DNA連接酶
限制酶和DNA連接酶
；步驟Ⅱ常用的方法是用
Ca2+
Ca2+
處理使細菌成為感受態(tài)細胞；為達到步驟Ⅰ預(yù)期的篩選目的，所用物質(zhì)X最可能為
三氯生
三氯生
。
（2）已知fabV基因（-A和-B代表從不同苗中獲得）可以使大腸桿菌抵抗三氯生。在圖中，fabV-A基因和fabV-B基因是
目的
目的
（目的/標記）基因。
（3）利用從細菌中提取的DNA通過PCR技術(shù)獲取fabV-A基因時，需要的特定酶是
Taq酶
Taq酶
。該酶只能從引物的
3'
3'
端延伸DNA鏈，而不能從頭開始合成DNA，因此需要先根據(jù)
目的基因fabV-B基因兩端序列
目的基因fabV-B基因兩端序列
設(shè)計兩種特異性引物序列。
（4）為獲得一種增強大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好的重組質(zhì)粒，將含有不同質(zhì)粒的大腸桿菌分別接種到相應(yīng)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)一段時間后，結(jié)果如圖2，則適宜選作構(gòu)建溫度調(diào)控表達質(zhì)粒的是
（重組質(zhì)粒）pEA
（重組質(zhì)粒）pEA
。
（5）科學(xué)家對上述選出質(zhì)粒進行改造，獲得了圖3所示質(zhì)粒。其中P1和P2是啟動子，可以啟動轉(zhuǎn)錄；C基因在低溫下會抑制P1；R基因在高溫下會抑制P2；T1和T2是終止子，可以終止轉(zhuǎn)錄。如果將lacZ基因和GFP基因插入圖質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為高溫下只表達GFP蛋白，而低溫下只表達lacZ蛋白。則以下說法正確的有
AD
AD
。
A.GFP基因插在R基因和終止子T1之間
B.lacZ基因插在R基因和終止子T1之間
C.GFP基因插在啟動子P2和終止子T2之間
D.lacZ基因插在啟動子P2和終止子T2之間

【答案】限制酶和DNA連接酶；Ca2+；三氯生；目的；Taq酶；3'；目的基因fabV-B基因兩端序列；（重組質(zhì)粒）pEA；AD
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/8/5 8:0:8組卷：3引用：1難度：0.5
相似題

  • 1．用限制酶EcoRⅤ單獨切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個堿基對）的長鏈，而同時用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的DNA片段，見圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個黏性末端）。
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    若用MboⅠ限制酶單獨切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細胞
    ⑤目的基因和運載體重組構(gòu)建表達載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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