正常機(jī)體中,氨基轉(zhuǎn)移酶主要存在于細(xì)胞內(nèi),在血清中活性很低。不同組織中同一種酶的活性不同,肝組織中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的活性最高。臨床上通過檢測(cè)血清中ALT的活性,作為診斷肝功能是否正常的依據(jù)。檢測(cè)原理為:
L-丙氨酸+物質(zhì)A丙酮酸
丙酮酸+物質(zhì)B物質(zhì)C
物質(zhì)C在強(qiáng)堿溶液中呈紅棕色,顏色深淺與丙酮酸生成量的多少即ALT活性的高低成正比。檢測(cè)過程如表所示:
操作步驟 |
加入物(mL) |
對(duì)照管 |
檢測(cè)管 |
① |
血清 |
0.1 |
0.1 |
② |
基質(zhì)緩沖液(含丙氨酸和物質(zhì)A,pH7.4) |
- |
0.5 |
③ |
混勻,37℃水浴30min |
④ |
用鹽酸配制的物質(zhì)B溶液 |
0.5 |
0.5 |
⑤ |
基質(zhì)緩沖液(含丙氨酸和物質(zhì)A,pH7.4) |
0.5 |
- |
⑥ |
混勻,37℃水浴20min |
⑦ |
0.4mol/LNaOH溶液 |
5.0 |
5.0 |
混勻后,測(cè)定檢測(cè)管和對(duì)照管的吸光度,并根據(jù)兩者的差值,再參照已有標(biāo)準(zhǔn)曲線,可得到ALT活性。回答下列問題。
(1)操作③水浴時(shí),若將溫度由37℃調(diào)為85℃,則血清中ALT活性將
失活
失活
(填“升高”“降低”或“失活”),其主要原因是
溫度過高,酶的空間結(jié)構(gòu)遭到破壞,使酶失活
溫度過高,酶的空間結(jié)構(gòu)遭到破壞,使酶失活
。
(2)操作②中,基質(zhì)緩沖液的作用是
為酶促反應(yīng)提供底物,維持溶液pH穩(wěn)定
為酶促反應(yīng)提供底物,維持溶液pH穩(wěn)定
。
(3)操作①中,若用生理鹽水代替對(duì)照管中的血清,會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高,主要理由
因?yàn)檠逯杏猩倭康谋彼岷臀镔|(zhì)A,在ALT的催化下,可生成少量丙酮酸,若用生理鹽水代替,對(duì)照管中就缺少這部分丙酮酸,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高。
因?yàn)檠逯杏猩倭康谋彼岷臀镔|(zhì)A,在ALT的催化下,可生成少量丙酮酸,若用生理鹽水代替,對(duì)照管中就缺少這部分丙酮酸,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏高。
。
(4)某人化驗(yàn)報(bào)告單顯示其血清的ALT活性為90卡門氏單位,明顯超過正常參考值,表明此人肝功能異常。分析ALT活性升高的原因
正常情況下,ALT主要存在于肝細(xì)胞中,由于某些原因?qū)е赂渭?xì)胞破裂或膜通透性增大,ALT大量釋放入血液,使血清中ALT活性明顯升高。
正常情況下,ALT主要存在于肝細(xì)胞中,由于某些原因?qū)е赂渭?xì)胞破裂或膜通透性增大,ALT大量釋放入血液,使血清中ALT活性明顯升高。
。